糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒_糖原系列_分光法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。
糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒_糖原系列_分光法
測(cè)定原理：
GP催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測(cè)定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）時(shí)測(cè)定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）時(shí)測(cè)定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體40 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1支， -20℃保存；
試劑五：粉劑×1支， -20℃保存；
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零；
2、工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前在試劑三瓶中加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、試劑四的配制：臨用前在試劑四瓶中加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
5、試劑五的配制：臨用前在試劑五管中加入1.25mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
6、將工作液、試劑三、試劑四和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘；
7、1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑三、50μL試劑四、50μL蒸餾水和800μL工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A1和10min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔAGPa=A2-A1。
8、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑三、50μL試劑四、50μL試劑五和800μL工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A3和10min后的吸光值A(chǔ)4，計(jì)算ΔAGP=A4-A3。
注意：由于每個(gè)樣本需要同時(shí)測(cè)一個(gè)GP（GPa和GPb）活性和一個(gè)GPa活性，因此本試劑盒50管測(cè)24個(gè)樣本。
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