脂肪酸代謝系列_CoA羧化酶ACC測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
ACC在生物體內(nèi)催化乙酰CoA羧化生成丙二酰CoA，是脂肪酸和許多次生代謝產(chǎn)物合成的關(guān)鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
測(cè)定原理：
ACC能夠催化乙酰CoA、NaHCO3和ATP生成丙二酰CoA、ATP和無(wú)機(jī)磷，通過(guò)鉬酸銨定磷法測(cè)定無(wú)機(jī)磷的增加量來(lái)測(cè)定ACC活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：10mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑六：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑七：10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
脂肪酸代謝系列_CoA羧化酶ACC測(cè)試盒_微量法
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)試劑的配制和預(yù)熱：在試劑二瓶中加入2.5mL試劑一，充分溶解混勻；在試劑三瓶中加入2mL蒸餾水，充分溶解混勻；將試劑一、二、三在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、定磷試劑的配制：按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑
應(yīng)為淺，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
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