脂肪酸代謝系列_丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
脂肪酸代謝系列_丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒
測(cè)定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體18mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體2.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1支，﹣20℃保存。
試劑五：液體30μL×1瓶，﹣20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六：液體2mL×1管，4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
PDC測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
環(huán)保在線