生物學(xué)研究離不開定量。對于定量，通常需要利用已知濃度的分子繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。zui近，研究人員介紹了一種新方法，能利用串聯(lián)質(zhì)譜儀對多個蛋白質(zhì)進行定量。
這種方法稱為MARQUIS（Multiplex Absolute Regressed Quantification with Internal Standards），依靠兩種現(xiàn)成的技術(shù)：重同位素標(biāo)記的合成肽段以及質(zhì)譜的同位素標(biāo)記試劑。iTRAQ和TMT等試劑有著相同的分子量，但在質(zhì)譜儀內(nèi)產(chǎn)生特征的片段。
在MARQUIS方法中，對于每個待定量的肽段，研究人員建立重同位素標(biāo)記的肽段。他們以不同的量混合這些肽段，并在組織或細胞裂解后立即將一種混合物加入每個生物樣品中。研究小組的負責(zé)人認(rèn)為：“這是關(guān)鍵的一步。你要盡早加入這些肽段，這樣重同位素標(biāo)記肽段和內(nèi)源肽段的損失可同時發(fā)生。”
隨后以同位素試劑標(biāo)記樣品，并加入質(zhì)譜儀中。每個肽段產(chǎn)生兩個峰：“重”峰代表合成的（加標(biāo)）肽段，而“輕”峰代表內(nèi)源性蛋白。通過定量前者碎片化所產(chǎn)生的標(biāo)記離子，研究人員能產(chǎn)生每個肽段的標(biāo)準(zhǔn)曲線。之后他們能測定對應(yīng)內(nèi)源性肽段的信號，確定樣品中存在多少分子。
研究小組利用MARQUIS定量了EGFR信號通路中的*磷酸化。在幾種配體刺激之后，他們在多個時間點定量了EGFR網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的磷酸化動力學(xué)，實現(xiàn)了EGFR磷酸化位點的定量比較，并證明了對于每種配體，受體磷酸化在性質(zhì)上相似，但數(shù)量上不同。他們還培養(yǎng)了膠質(zhì)母細胞瘤異種移植物，并應(yīng)用這種方法定量了EGFR激酶抑制的效果。
有了這種方法，你就能看到那兒有多少靶點，藥物是否命中靶點，以及更重要的是，靶點抑制是否有效阻斷了下游的磷酸化。
