ELISA試劑盒此法適用于查驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只需獲得對于受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶聯(lián)絡(luò)物而樹立此法.如抗體的來歷為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體別離取自不一樣種屬的動物.如運(yùn)用單克隆抗體,通常挑選兩個對于抗原上不一樣決定簇的單抗,別離用于包被固相載體和制備酶聯(lián)絡(luò)物.這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且能夠?qū)⑹軝z標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一同保溫反響,作一步檢查. 在一步法測定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原別離和固相抗體及酶標(biāo)抗體聯(lián)絡(luò),而不再構(gòu)成"夾心復(fù)合物".
用作雙抗體夾心法檢查的血清標(biāo)本中如富含RF,它可充任抗原成份,一同與固相抗體和酶標(biāo)抗體聯(lián)絡(luò),表現(xiàn)出假陽性反響.選用F(ab')或Fab片段作酶聯(lián)絡(luò)物的試劑,由于去除了Fc段,然后消除RF的干擾.雙抗體夾心法ELISA試劑盒是不是受RF的影響,已被列為這類試劑的一項(xiàng)查核政策。
1雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能構(gòu)成兩位點(diǎn)夾心.
2 雙抗原夾心法測抗體 反響方式與雙抗體夾心法相似.用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶聯(lián)絡(luò)物,以檢查相應(yīng)的抗體.與直接法測抗體的不一樣的地方為以酶標(biāo)抗原替代酶標(biāo)抗抗體.此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因而其敏感度相對高于直接法.乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢查常選用本法.本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不一樣,尋找適宜的符號辦法.
3 直接法測抗體 直接法是檢查抗體常用的辦法.其原理為運(yùn)用酶符號的抗抗體(抗*抗體)以檢查與固
相抗原聯(lián)絡(luò)的受檢抗體,故稱為直接法.操作進(jìn)程如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)合,構(gòu)成固相抗原.洗刷除掉未聯(lián)絡(luò)的抗原及雜質(zhì).
2)加稀釋的受檢血清,保溫反響.血清中的特異抗體與固相抗原聯(lián)絡(luò),構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物.經(jīng)洗刷后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的別的成份在洗刷進(jìn)程中被洗去.
3)加酶標(biāo)抗抗體.可用酶標(biāo)抗人Ig以檢查總抗體,但通常多用酶標(biāo)抗人IgG檢查IgG抗體.固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體聯(lián)絡(luò),然后直接地符號上酶.洗刷后,固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān).
4)加底物顯色本法首要用于對病原體抗體的檢查而進(jìn)行流行癥的確診.直接法的利益是只需變換包被抗原就可運(yùn)用同一酶標(biāo)抗抗體樹立.直接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度.盡管有時用粗提抗原包被也能獲得實(shí)踐有用的作用,但應(yīng)盡可能予以純化,以行進(jìn)實(shí)驗(yàn)的特異性.分外應(yīng)留神除掉能與通常健康人血清發(fā)生反響的雜質(zhì),
ELISA試劑盒直接法中另一種干擾要素為正常血清中所含的高濃度的非特異性.病人血清中受檢的特異性IgG只占總IgG中的一小部分.IgG的吸附性很強(qiáng),非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面.
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