ELISA試劑盒目視法簡(jiǎn)捷清楚，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這么可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample，S)、陽(yáng)性對(duì)照(P)、和陰性對(duì)照(N)的吸光值，然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算辦法有多種，大致可分為陽(yáng)性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。a．陽(yáng)性判定值陽(yáng)性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為區(qū)分效果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。用此法區(qū)分效果懇求試驗(yàn)條件非常安穩(wěn)，試劑的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的標(biāo)準(zhǔn)，須配用精密的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)矩操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中經(jīng)過(guò)對(duì)許多標(biāo)本的試驗(yàn)查看而得到的?，F(xiàn)舉某種查看HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml.每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。
在前期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿襲。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用試驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留心的是，N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。洗刷的辦法除某些ELISA儀器配有特其他自動(dòng)洗刷儀外，手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種，進(jìn)程如下：
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗刷液過(guò)洗一遍(將洗刷液注滿板孔后，即甩去)；c.浸泡，即將洗刷液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖晃，浸泡時(shí)刻不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗刷3-4次(或按說(shuō)明規(guī)矩)。在間接法中如本底較高，可增加洗刷次數(shù)或延伸浸泡時(shí)刻。
微量滴定。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的聯(lián)絡(luò)是疏水性的，非離子型洗刷劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基ELISA試劑盒團(tuán)借疏水鍵聯(lián)絡(luò)，然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的聯(lián)絡(luò)，并借助于親水基團(tuán)和水分子的聯(lián)絡(luò)效果，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀況，然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
(2)流水沖刷式流水沖刷法開(kāi)端用于小珠載體的洗刷，洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來(lái)水。洗刷時(shí)附接一格外設(shè)備，使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗，持續(xù)沖刷2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖刷式則比方淋浴，其洗刷效果更為*，且也簡(jiǎn)潔、迅速。已有試驗(yàn)標(biāo)明，流水沖刷式相同也適用于微量滴定板的洗刷。洗刷時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水ELISA試劑盒壓，讓水流沖擊板孔外表，洗刷效果更佳。本月公司全場(chǎng)7.5折優(yōu)惠，ELISA試劑盒本司供應(yīng)來(lái)樣查看效力（免費(fèi)），客戶只需把您的標(biāo)本寄過(guò)來(lái)，我們保證出效果。含稅含運(yùn)費(fèi)，等待咨詢。
ELISA試劑盒試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見(jiàn)3.6)。在用肉眼區(qū)分效果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽(yáng)性的指標(biāo)。目視法簡(jiǎn)捷清楚，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這么可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample，S)、陽(yáng)性對(duì)照(P)、和陰性對(duì)照(N)的吸光值，然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算辦法有多種，大致可分為陽(yáng)性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。a．陽(yáng)性判定值陽(yáng)性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為區(qū)分效果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。用此法區(qū)分效果懇求試驗(yàn)條件非常安穩(wěn)，試劑的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的標(biāo)準(zhǔn)，須配用精密的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)矩操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中經(jīng)過(guò)對(duì)許多標(biāo)本的試驗(yàn)查看而得到的?，F(xiàn)舉某種查看HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml.每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后，先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX)和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX)，兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400)，試驗(yàn)才有用。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)劃，則棄去，算了另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上規(guī)劃，則該次試驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算：陽(yáng)性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值＞陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應(yīng)留心的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。根據(jù)以上敘說(shuō)可以看出，在這種辦法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不當(dāng)均會(huì)發(fā)作"試驗(yàn)無(wú)效"的后果。b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值在試驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證安穩(wěn)的情況下，這種區(qū)分法較為適合。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后，計(jì)算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這兒的P不代表陽(yáng)性(positive)，而是病人(patient)的縮寫(xiě)，不應(yīng)誤解。為避免稠濁，更宜用S/N表明。在前期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿襲。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用試驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留心的是，N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。洗刷的辦法除某些ELISA儀器配有特其他自動(dòng)洗刷儀外，手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種，進(jìn)程如下：
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗刷液過(guò)洗一遍(將洗刷液注滿板孔后，即甩去)；c.浸泡，即將洗刷液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖晃，浸泡時(shí)刻不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗刷3-4次(或按說(shuō)明規(guī)矩)。在間接法中如本底較高，可增加洗刷次數(shù)或延伸浸泡時(shí)刻。
微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的聯(lián)絡(luò)是疏水性的，非離子型洗刷劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵聯(lián)絡(luò)，然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的聯(lián)絡(luò)，并借助于親水基團(tuán)和水分子的聯(lián)絡(luò)效果，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀況，然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
(2)流水沖刷式流水沖刷法開(kāi)端用于小珠載體的洗刷，洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來(lái)水。洗刷時(shí)附接一格外設(shè)備，使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗，持續(xù)沖刷2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖刷式則比方淋浴，其洗刷效果更為*，且也簡(jiǎn)潔、迅速。已有試驗(yàn)標(biāo)明，流水沖刷式相同也適用于微量滴定板的洗刷。洗刷時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔外表，洗刷效果更佳。本月公司全場(chǎng)7.5折優(yōu)惠，ELISA試劑盒本司供應(yīng)來(lái)樣查看效力（免費(fèi)），客戶只需把您的標(biāo)本寄過(guò)來(lái)，我們保證出效果。含稅含運(yùn)費(fèi)，等待咨詢。
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