植物中DNA的提取
目的要求
學(xué)習(xí)從新鮮的葉片中提取植物總DNA的方法
實(shí)驗(yàn)原理
本實(shí)驗(yàn)介紹的是一種快速簡(jiǎn)便提取植物總DNA的方法；先將新鮮的葉片在液氮中研磨，以機(jī)械力破碎細(xì)胞壁，然后加入十六烷*基*分離緩沖液，使細(xì)胞膜破裂，同時(shí)將核酸與植物多糖等雜質(zhì)分開(kāi)。在經(jīng)氯仿異戊醇提取去除蛋白，即可得到適合于酶切的DNA。
劑和器材
1、試劑
CTBA抽提緩沖液：稱取2g CTBA，8.18gNaC1, 0.74g EDTA Na2·2H2O，加入10mL、1mol/L的Tris-HC1,pH8.0 ,0.2mLde 疏基乙醇，加水定溶至100mL。
TE：10mmol/L Tris-HC1，pH8.0；1mmol/L EDTA。
異丙醇；乙醇；氯仿-異戊醇；液氮。
2、材料
新鮮植物葉片
3、器材
研缽、離心機(jī)、恒溫水浴。
操作方法
1、稱取1g新鮮葉片，置于預(yù)冷的研缽中，倒入液氮，將葉片至粉末。
2、將葉片粉末轉(zhuǎn)入一個(gè)30mL離心管中，加10mLCTBA抽提緩沖液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)離心管使之混勻。于65℃溫育10min。
3、加入等體積的氯仿-異戊醇，輕輕顛倒混勻。
4、育溫下4000r/min離心10min，回收上層水相。
5、在回收的上層水相中，加入2/3體積預(yù)冷的異丙醇，輕輕混勻，置冰箱中放置數(shù)小時(shí)甚至過(guò)夜，使核酸沉淀下來(lái)。
6、室溫下4000r/min離心10min。
7、小心倒去上清液，用80%乙醇洗滌沉淀物。盡量瀝干乙醇，置于真空干燥器內(nèi)干燥，稱重，計(jì)算產(chǎn)率。
8、將DNA沉淀溶于1mL TE中。
注意事項(xiàng)
提取過(guò)程中的機(jī)械力可能使大分子DNA斷裂成小片段，所以為保證DNA的完整性，各步操作均應(yīng)較溫和，避免劇烈震蕩。
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