液相色譜儀操作步驟：
1）過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2）對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3）打開HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動相管道，鏈接監(jiān)測系統(tǒng)。
4）進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動菜單。
5）有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10ml/min
6）調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000.點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7）設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file。選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點(diǎn)擊 new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘； b.基線歸零； c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換； d.走樣時(shí)間，隨不同樣品而不同。
8）進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9）關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
10）填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
注意事項(xiàng)：
1）流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2）柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3）所有過柱子的液體均需嚴(yán)格地過濾。
4）壓力不能太大，不要超過2000psi
1.使用“保護(hù)柱”，能夠延長色譜柱的使用壽命。簡單的說，“保護(hù)柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的“保護(hù)柱”，可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長柱子壽命的效果。如果使用“保護(hù)柱”不當(dāng)會造成反效果。因?yàn)槎荚诒Ｗo(hù)柱使用過程中。如污染達(dá)到一定程度而沒有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會沖入色譜柱中，反而會造成色譜柱損壞。因此。使用“保護(hù)柱”時(shí)，zui重要的是要知道什么時(shí)候該保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。
2.選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用方法；可以延長柱子的使用壽命。一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質(zhì)都相同，對品質(zhì)管理很嚴(yán)格的廠家而言，這種說法是成立的。但如果廠家質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過后都會產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)信分析方法時(shí)，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會改變；如此一來，使用舊柱子開發(fā)出來的新分析方法，很可能在使用同廠牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無法達(dá)到預(yù)定效果的情況?？偟恼f。開發(fā)新分析方法時(shí)使用品質(zhì)好的新主子；并且一直柱子使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長。
3.定期沖洗柱子可以延長柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時(shí)間后總會有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)。這些雜質(zhì)不會隨著流動相出來，自然會逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來的分析譜圖上出現(xiàn)。而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡單的解決方法是用較強(qiáng)的流動相沖洗。是在每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時(shí)使用緩沖劑時(shí)，用水來取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果不先用有機(jī)和水的混合溶液沖洗，而直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會沉淀出來，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了。專家建議將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實(shí)驗(yàn)程序完畢的zui后，如此一來每天在開機(jī)前都會用100%有機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理，即是在將沖洗前將柱子倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前，先參考柱子的保養(yǎng)說明書。所以要真正保護(hù)柱子，使用柱子的壽命延長，是使用“保護(hù)柱”和定期沖洗柱子。
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