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技術文章

高效液相色譜Pico-Tag法測定野蕨菜氨基酸成分

閱讀:466發(fā)布時間:2019-12-26

   高效液相色譜(HPLC)Pico-Tag法因采用柱前衍生,反相色譜分離,具有分析時間短、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點,廣泛地用于各種類型樣品的氨基酸成分分析。

   野蕨菜具有*的野味,無農(nóng)yao污染,營養(yǎng)豐富,長期食用能延年益壽。因此廣泛受到國內(nèi)外人士的喜愛,尤其是東南亞各國朋友的喜愛。為此,我們HPLC Pico-Tag法對四川雅安地區(qū)野蕨菜氨基酸成分進行了測定,結(jié)果令人滿意。

儀器準備

 

儀器簡介

    LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。

 

應用領域

化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析

溶液配制:

A液  19.0g三水醋酸鈉,0.5mL三乙胺溶解于1L超純水中。用冰醋酸調(diào)pH為6.4,用0.45μm濾膜過濾,取此液940mL,加入60mL乙腈,混勻,超聲波脫氣20s(或充氮保存)

B液  分別量取600mL乙腈,400mL水,混勻,超聲波脫氣20s備用。

樣品稀釋液  取710mg Na2HPO4加超純水至1000mL,用10%磷酸-乙腈(95:5)調(diào)pH為7.4備用。

樣品水解液  1g*溶解于6mol/LHCI100mL中

再干燥液  乙醇:水:三乙胺=2:2:1

衍生液  異硫氰酸苯(PITC):乙醇:三乙胺:水=1:7:1:1

實驗方法:

取整株鮮蕨菜切碎,于105℃烘至恒重,用研缽磨細,精確稱取100mg左右樣品放入180mm×18mm試管中,加6mol/L HCI 10mL,巰基乙醇20μL,正辛醇二滴,混勻,用0.45μm濾膜過濾。取濾液20μL,放入6mm×50mm小管,裝入水解臺,在60-100mT下干燥20-30min,加15μL再干燥液,混勻,干燥20-30min。加20μL衍生液,混勻,室溫下放置10min。干燥之后,加入100μL樣品稀釋液,混勻,即可進樣分析。

譜條件:

色譜柱

Pico-Tag HAA-Column 3.9mmi.d×150mm

柱溫

38℃

波長

254nm,0.1AUFS

 

譜圖分析

 


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