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南京科捷檢測(cè)科技發(fā)展有限公司
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閱讀：591發(fā)布時(shí)間：2020-11-12
硒是人體必需微量元素，存在于抗氧化酶和甲狀腺素代謝酶的活性中心，缺硒導(dǎo)致克山病，合理補(bǔ)硒可有效減少人類及動(dòng)物罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸，是生物利用度zui高的有機(jī)硒化物，人體吸收后可在體內(nèi)形成硒儲(chǔ)備池。富*是被廣泛研究的食品硒補(bǔ)充劑，在培養(yǎng)基中加入無機(jī)硒，利用酵母將難吸收的無機(jī)硒源轉(zhuǎn)化為易吸收的有機(jī)硒源。將富*納入飲食中作為硒補(bǔ)充劑可減少大約50%的癌癥發(fā)病率與死亡率。作為硒代蛋氨酸的來源，富*中總硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在，富*中硒代蛋氨酸的含量對(duì)評(píng)價(jià)其質(zhì)量與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值具有重要意義。
目前，國(guó)外測(cè)定富*中硒代蛋氨酸的方法有高效液相色譜串聯(lián)電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HPLC-ICP-MS），高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS），毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光法（CE-ECL）等，國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)較少。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)富*中硒代蛋氨酸進(jìn)行分析，采用酶解法進(jìn)行樣品提取，通過對(duì)樣品的色譜分離及衍生等條件進(jìn)行研究，建立丹磺酰氯（DNS-CI）柱前衍生高效液相色譜-熒光法測(cè)定富*中硒代蛋氨酸。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡(jiǎn)介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測(cè)器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測(cè)器及恒溫柱箱等，實(shí)行多元高壓洗脫、波長(zhǎng)掃描等功能。
應(yīng)用領(lǐng)域
化合物檢測(cè)、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測(cè)、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
樣品提取：
稱取0.1g經(jīng)冷凍研磨的富*原料（或0.5g富*產(chǎn)品），置于10mL離心管中，加入5mL0.05mol/L磷酸氫鈉緩沖液（pH=7.4），40mg蛋白酶XIV，充分混勻后于37℃搖床振搖24h。振搖結(jié)束后向樣品酶解液中加入0.1mL1.5g/L亞鐵**化鉀溶液及0.1mL3g/L乙酸鋅溶液，充分混勻后在3000r/min下離心10min，取上清液待測(cè)，用80mmol/L碳酸鈉緩沖液（用1mol/LHCI調(diào)節(jié)pH至9.5）適當(dāng)稀釋，使樣品含量在方法線性范圍內(nèi)。
色譜條件：
色譜柱 | Pursuit XRs C18色譜柱（250mm×4.6mm,5μm） |
檢測(cè)器 | 熒光檢測(cè)器 |
激發(fā)光波長(zhǎng) | 320nm |
發(fā)射波長(zhǎng) | 523nm |
柱溫 | 30℃ |
進(jìn)樣量 | 10μL |
流動(dòng)相 | 乙腈-10mmol/L*緩沖液（含4%N，N-二甲基甲酰胺pH=6.55） |
流速 | 1.0mL/min |
梯度洗脫程序 | （T，乙腈%）0min，14%；5min，20%；10min，25%；12min，25.6%；15min，25.7%；19min，25.9%；23min，26.5%；30min，27%；34min,30%;38min,43%;41min,68%;45min,68%;47min,86%;52min,86% |
譜圖分析：
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