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信帆生物
中級會(huì)員 | 第11年

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信帆生物:水性膠層析改良抗球蛋白試驗(yàn)方法

時(shí)間:2016/4/13閱讀:1602
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在常規(guī)的抗體篩檢、鑒定以及交叉配血中,要求對具有輸血史、妊娠史及輸過血的受血者和供血者都應(yīng)做不*抗體檢測;此外對新生兒溶血病、自身免疫性溶血病、藥物免疫溶血性疾病等診斷中,也都要求常規(guī)檢測不*抗體。

抗人球蛋白試驗(yàn)[anti-human globulin(AHG) test or Coombstest,Coombs T]zui初只用于檢測血清中不*抗體,經(jīng)過發(fā)展后,試管法的Coombs T始用于檢測患者體內(nèi)已經(jīng)結(jié)合了抗體和/或補(bǔ)體的紅細(xì)胞。但由于抗人球蛋白與血清中致敏紅細(xì)胞的抗體及血清中游離的免疫球蛋白都能結(jié)合,因此在試管法Coombs T時(shí)首先要洗滌去除未與紅細(xì)胞結(jié)合的游離免疫球蛋白,再加入抗人球蛋白,以避免抗人球蛋白被反應(yīng)液中非特異性免疫球蛋白中和而出現(xiàn)的假陰性反應(yīng)。由此導(dǎo)致其操作繁瑣、費(fèi)時(shí),且一些弱反應(yīng)抗體不能檢出等缺點(diǎn),難以滿足血型相容性試驗(yàn)的時(shí)間性要求。

上世紀(jì)90年代出現(xiàn)的微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)(microtube gel Coombs test,MG-Coombs T),因?yàn)槿サ袅讼礈斐绦颍懦蔀榱顺R?guī)檢測血型不*抗體的方法;但MG-Coombs T尚存在血液標(biāo)本中纖維蛋白原易造成假陽性、試劑原材料Sephadex價(jià)格高等缺點(diǎn)或問題,此外凝膠卡中的原材料凝膠顆粒多為進(jìn)口,受少數(shù)公司壟斷,近年來價(jià)格越來越高,間接導(dǎo)致檢測成本的提高。這就是為什么MG-Coombs T在未能進(jìn)一步廣泛推廣的原因。

針對這一難題,中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所李勇研究員所帶領(lǐng)的血液免疫學(xué)與免疫遺傳學(xué)課題組建立了水性膠層析改良抗球蛋白試驗(yàn)(HCI-Coombs T)方法,通過將含紅細(xì)胞和血清的反應(yīng)液置于水性膠介質(zhì)試管中,低速離心使紅細(xì)胞穿過水性膠到達(dá)試管底部,而血清中非特異性球蛋白等滯留在水性膠之上,棄去反應(yīng)液和水性膠介質(zhì)后加入抗人球蛋白試劑,離心后觀察血凝結(jié)果(如圖)。

采用 HCI-Coombs T 的優(yōu)勢在于,通過低速離心后,紅細(xì)胞沉降到試管底部,而游離蛋白仍留在水性膠上層,棄去水性膠后即可達(dá)到將兩者分離的目的,從而代替經(jīng)典Coombs T中多次洗滌過程,省卻了傳統(tǒng)試管法孵育后需多次洗滌紅細(xì)胞的繁瑣程序,減少了傳統(tǒng)試管法試驗(yàn)可能因?yàn)橄礈旒t細(xì)胞不干凈而產(chǎn)生的假陰性問題,同時(shí)避免了微柱凝膠法中纖維蛋白原以及陳舊標(biāo)本容易出現(xiàn)的假陽性,具有操作簡單快速、準(zhǔn)確性高、特異性好、原材料價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn);而且水性膠介質(zhì)的性質(zhì)受到溫度變化影響較小,同時(shí)適用于大量標(biāo)本的高通量檢測,此外水性膠介質(zhì)用途廣泛,可用于免疫標(biāo)記技術(shù)(如elisa、免疫熒光、流式細(xì)胞法等)中其他顆粒性抗原抗體復(fù)合物的分離。

相關(guān)結(jié)果已發(fā)表在2014年《中國輸血雜志》第三期上,并被選為封面文章。從各個(gè)選擇的試驗(yàn)機(jī)構(gòu)反饋的信息來看,該診斷試劑檢測方法具有簡單快速、成本低廉、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn),并得到了使用者的認(rèn)可,目前該研究成果正在進(jìn)行醫(yī)療器械一類產(chǎn)品的注冊。

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