原因	解決辦法
抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長	降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃過夜
孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃	一般室溫20-28℃
DAB顯色時(shí)間過長或DAB濃度過高	顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

2、非特異性背景染色

3、染色弱

原因	解決辦法
抗體濃度過低，孵育時(shí)間過短	提高抗體濃度，孵育時(shí)間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期	及時(shí)更換試劑
操作中，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋	每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥）
室溫太低，低于15℃	若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過夜）
蛋白封閉過度	封閉時(shí)間不要超過10分鐘

4、染色陰性

原因	解決辦法
操作步驟錯(cuò)誤	重新試驗(yàn)，設(shè)立陽性對(duì)照
組織中無抗原	設(shè)立陽性對(duì)照片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤	仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤

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信帆生物：免疫組化問題及解決辦法