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信帆生物
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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MMP-2&MMP-9明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒的結(jié)果判斷與分析

時(shí)間:2017-5-15閱讀:1717
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基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無(wú)活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過(guò)程,并參與炎癥、腫瘤、、神經(jīng)等許多疾病過(guò)程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過(guò)程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

酶譜法的基本過(guò)程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價(jià)金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色,再脫色,在藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶,條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

在電泳過(guò)程中,SDS與樣品中的MMPs結(jié)合(當(dāng)然是可逆性結(jié)合),破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用,而只有當(dāng)將膠置Triton中洗脫(是放在搖床上搖,30min/次,做2次或15min/次,4次。靜置于Trition中是不妥的。)時(shí),由于SDS被Triton結(jié)合而去除,從而使MMPs恢復(fù)了活性

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1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

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