信帆為您解答鮭魚降鈣素（SCT）ELISA 試劑盒的疑惑

時間：2017-9-27閱讀：902

信帆為您解答鮭魚降鈣素（SCT）ELISA 試劑盒的疑惑

本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系

問題1：如果我們代測的樣本是組織樣本，請問應(yīng)該選用什么來組織勻漿,濃度是多少?

答：一般我們試劑盒的組織勻漿，都是按照10%進行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液可以選取生理鹽水，也可以選取PBS,但是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol.

問題2：請問各種標本的處理方式，你可以發(fā)給我一下嗎？
答：當然可以。標本要求如下：
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。信帆為您解答鮭魚降鈣素（SCT）ELISA 試劑盒的疑惑
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
5.培養(yǎng)細胞：檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融.
8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。信帆為您解答鮭魚降鈣素（SCT）ELISA 試劑盒的疑惑

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