人饑餓素 ghrelin ELISA試劑盒的基本知識

時間：2017-10-11閱讀：893

人饑餓素 ghrelin ELISA試劑盒的基本知識

產(chǎn)品中文：	人饑餓素 (ghrelin) ELISA試劑盒
產(chǎn)品英文：	RAT IL-2 ELISA KIT
規(guī)格：	48T/96T
保質(zhì)期：	6個月
保存條件：	2到8度

ELISA技術(shù)原理：以免疫學反應為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來.

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。

標本的保存：
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樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

一般說來，在 5 天內(nèi)測定的標本可放置于 4℃，超過一周測定的需低溫凍存。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分標本也可加入適當防腐劑，激素類標本需添加抑肽酶。
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