ATP 含量測試盒

（100 管/48 樣）

一、檢測意義：

三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生

物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換最基本的載體, 其含量的變化直接關(guān)系

到各器官的能量代謝。ATP 作為最重要的能量分子在細(xì)

胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP 水平的

改變，會影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死

或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP 水平會下降，而高葡萄糖

刺激等對于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ATP 水平。通常

ATP 水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細(xì)胞

凋亡時(shí) ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同

時(shí)發(fā)生狀態(tài)。ATP 含量測定試劑盒可以用于檢測紅細(xì)胞

或組織內(nèi)的 ATP 水平。

二、測定原理：

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，

用磷鉬酸比色法進(jìn)行檢測。

三、試劑組成及配制：（100 管/48 樣）（本試劑盒附送雙蒸水

一瓶，供客戶配試劑時(shí)使用）

[注]：本試劑盒中 ATP3# 粉劑-20℃冷凍保存，其余試劑 4℃

保存，有效期 3 個(gè)月，開封后有效期為 1 個(gè)月。

四、樣本前處理：

1、紅細(xì)胞：抗凝全血取下層壓積紅細(xì)胞，一般按 1：4 的體

積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋，再混勻使溶血，制備成溶

血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10

分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10 分鐘，

取上清液待測。

2、組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重，按重量（g）：體積（ml）

=1：9 的比例，加入 9 倍體積的冷雙蒸水，冰水浴勻漿,

制成 10%的勻漿液(取出部分 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取

上清測定蛋白濃度)，再置于沸水浴中煮 10 分鐘，取出

混勻抽提 1 分鐘，3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，取上清液待

測。

3、培養(yǎng)細(xì)胞：先離心處理將細(xì)胞與培養(yǎng)上清分離，除去培

養(yǎng)上清，得到下層沉淀細(xì)胞（一般細(xì)胞數(shù)量達(dá)到 10 6），

將收集好的細(xì)胞加入 300～500μL 冷雙蒸水，置于冰水

浴中勻漿破碎(取出部分測定蛋白濃度)，后將細(xì)胞懸液

于沸水浴中加熱 10 分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，即可

用于測定。[注]：混勻抽提 1 分鐘即為漩渦混勻 1 分鐘。

六、簡便操作表：（如果樣本量大，建議將試劑混合后再按照

該表進(jìn)行操作）

1、混合試劑配制：

工作液 A: 按試劑一:試劑二:試劑三=100:200:30 的比

例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少。

工作液 B: 按試劑一:試劑二=100:200 的比例配制，現(xiàn)

用現(xiàn)配，用多少配多少。

八、注意事項(xiàng)：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。對測定所用試

管要求嚴(yán)格，要求不能有任何磷污染，建議用一

次性塑料試管 ，避免磷污染是檢測成敗

的關(guān)鍵；

2、顯色應(yīng)用液配好后，不可放置太久，一．般．可．保．存．五．

天．，現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時(shí)放冰箱；

3、組織勻漿宜用 2%～5%濃度的勻漿上清，若樣本濃度

過高，則底色過深（對照管 OD 過高），需稀釋后再

進(jìn)行測定；一般通過做預(yù)試驗(yàn)將對照 OD 值控制在

1.0 以下。

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