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公司動(dòng)態(tài)

如何提高PCR擴(kuò)增的保真性

閱讀：126發(fā)布時(shí)間：2015-11-27

下游應(yīng)用為基因篩選、測(cè)序、突變檢測(cè)和分子診斷等等的用戶，對(duì)PCR保真性要求很高。

降低PCR擴(kuò)增的錯(cuò)誤率可以通過(guò)使用各種具有高保真性的dna聚合酶來(lái)實(shí)現(xiàn)。

DNA聚合酶的保真度用錯(cuò)誤率來(lái)表示，包括堿基錯(cuò)配率、PCR產(chǎn)物突變百分?jǐn)?shù)等。

在目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA 聚合酶中，Pfu酶的出錯(cuò)率zui低，保真度zui高（見(jiàn)附表）。

除對(duì)酶進(jìn)行選擇，研究者也可通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件來(lái)進(jìn)一步減少PCR突變率，包括優(yōu)化緩沖液組成、耐熱聚合酶的濃度及對(duì)PCR循環(huán)條件進(jìn)行優(yōu)化等。

附表： DNA聚合酶的擴(kuò)增錯(cuò)誤率

耐熱DNA聚合酶

堿基錯(cuò)配率

★PCR產(chǎn)物突變百分?jǐn)?shù)（％）

Pfu DNA Polymerase

1.3×10-6

2.6

Taq DNA Polymerase

8.0×10-6

16.0

VentR ® DNA Polymerase

2.8×10-6

5.6

Deep VentR ® DNA Polymerase

2.7×10-6

5.4

Tfl DNA Polymerase

8.3×10-6

16.6

Tbr DNA Polymerase

9.5×10-6

19.0

ΜlTmaTM DNA Polymerase

55.3×10-6

110.6


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