支原體又稱(chēng)霉形體，是很小的原核細(xì)胞，*沒(méi)有細(xì)胞壁．菌體形態(tài)多變，具高度多形性，球形、梨形、分枝的或螺旋的絲狀等。營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，在高血清量的復(fù)雜培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，在固體培養(yǎng)基上菌落呈油煎荷包蛋樣特征性外觀。 

培養(yǎng)基：牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基等。分離培養(yǎng)：無(wú)菌采取肺、肝、脾、腎組織，直接剪成小塊放在固體培養(yǎng)基上劃一直線(xiàn)，再用無(wú)菌鉑耳環(huán)在與其垂直方向劃線(xiàn)，或者將組織塊剪碎磨成勻槳，經(jīng)液

體培養(yǎng)基連續(xù)系列稀釋后培養(yǎng)．若當(dāng)液體材料為牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接種于液體培養(yǎng)基或取0.1ML接種于固體培養(yǎng)基。固體瓊脂平板置37攝氏度潮濕需氧條件或在５％二氧化碳下培養(yǎng)48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立體顯微鏡檢查,若有特異菌落出現(xiàn),應(yīng)選取散在的單個(gè)菌落用無(wú)菌*切下小瓊脂塊,用巴氏吸管小心地將菌落和周?chē)傊?再將其移入盛有2-3ML的液體肉湯培養(yǎng)管培養(yǎng)48h,將其培養(yǎng)物通過(guò)0.45微升孔徑大小的濾膜過(guò)濾后作1:10和1:100稀釋,每一個(gè)稀釋液取0.05ML涂布于幾個(gè)瓊脂平板,即可得到純的支原體培養(yǎng)物。

牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基：
牛心湯1000ml
蛋白胨10g
氯化鈉5ml
酵母提取液10ml
無(wú)菌馬血清200ml
溶液20ml
*200IU/ml
實(shí)驗(yàn) 支MP 肺炎支原體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
一、標(biāo)本采集
支原體常侵及人和動(dòng)物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3ml支原體液體培養(yǎng)基的小管中，或取其分泌液，若標(biāo)本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿后接種，取樣后應(yīng)盡快接種培養(yǎng)。

二、分離培養(yǎng)
1、支原體固體培養(yǎng)基接種法 轉(zhuǎn)動(dòng)拭子將標(biāo)本液體盡量擠出，用無(wú)菌滴管吸1~2滴接種在平皿上蓋好，用L棒涂抹或傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使標(biāo)本均勻分布，置37℃孵育。
2、支原體半固體培養(yǎng)基接種法 混種法：在制備半固體培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基加熱溶化，溫度降至50℃時(shí)，添加動(dòng)物血清、酵母浸液及*后混勻，待冷卻至37~40℃時(shí)，用無(wú)菌滴管吸取標(biāo)本0.5~1ml加入培養(yǎng)基中，充分混勻，凝固后置37℃孵育。
3、穿刺接種法：方法同細(xì)菌接種法。

三、結(jié)果觀察 
絕大多數(shù)支原體為兼性厭氧，少數(shù)在含10% CO2和相對(duì)濕度80~90%的大氣環(huán)境中生長(zhǎng)良好。支原體生長(zhǎng)緩慢，多數(shù)于3~4d長(zhǎng)出菌落，少數(shù)于1~2w方長(zhǎng)出典型菌落，在平皿固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈"油煎蛋"狀，邊緣不整齊。