因此，在使用間接法測(cè)定IgM抗體時(shí)，通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或A預(yù)處理，以去除IgG的干擾。這樣不但測(cè)定較為繁瑣，而且影響測(cè)定的特異性和靈敏度。目前，常用的IgM抗體檢測(cè)方法為捕獲法，即以抗人IgM抗體(抗人u鏈)作為固相抗體，當(dāng)加入血清標(biāo)本時(shí)，ELISA檢測(cè)試劑盒其中的IgM類(lèi)抗體(特異的和非特異的)即可被固相抗體捕獲，再加入特異抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)抗特異抗原的抗體，zui后加入底物顯色。具體操作步驟如下：
1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過(guò)夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗體，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2．加入含待測(cè)IgM抗體的臨床樣本如血清等，ELISA檢測(cè)試劑盒溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，待測(cè)樣本中的IgM抗體就會(huì)與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上。
3．加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，特異抗原就會(huì)與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。
4．加入酶標(biāo)記的抗特異抗原的抗體，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。而特異IgM由于處于相應(yīng)病原體的急性感染期，滴度很高，ELISA檢測(cè)試劑盒一定稀釋后，不會(huì)有明顯影響，況且，在某些病原體如HBV的慢性感染階段，IgM類(lèi)特異抗體也能持續(xù)存在，只不過(guò)滴度要低很多。