卡邁舒化學技術(shù)(上海)有限公司專業(yè)致力于各種屬ELISA試劑盒的研發(fā),并無償提供代檢測服務(wù),是國內(nèi)多家科研機構(gòu)及高校的ELISA試劑盒專業(yè)供應(yīng)商,人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒是我司*產(chǎn)品之一,質(zhì)量保證,*,發(fā)貨及時,運輸嚴格,產(chǎn)品得到諸多單位科研工作者的認可與支持,更有專業(yè)的技術(shù)團隊用心為您的科研之路保駕護航~
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒中內(nèi)容(96孔)
1. 重組人VEGF凍干標準品,10ng/管,總2管。
2. 預包被抗人VEGF抗體的96孔板。
3. 樣品稀釋液,30ml。
4. *標記抗人VEGF,120μl,效價1:100。
5. 抗體稀釋液,12ml。
6. 親和素-過氧化物酶復合物(ABC),120μl,效價1:100。
7. ABC稀釋液,12ml。
8. TMB顯色液,10ml。
9. TMB終止液,10ml。
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器。
4. 干凈的試管和Eppendof管。
5. 使用中性PBS或TBS作為洗滌液。0.01M TBS配法為:1000ml H2O中加Tris 1.2g, NaCl 8.5g; 純乙酸450μl或濃鹽酸700μl左右調(diào)節(jié)pH值(7.2-7.6)。 0.01 M PBS(pH7.2-7.6)配法:1000ml蒸餾水中加氯化鈉8.5g, Na2HPO4·12H2O 3.5g, NaH2PO4·2H2O 0.25g。
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
操作程序
所有試劑用前需在室溫平衡。試劑或樣品稀釋時,切不可忘記混勻。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如果估計樣品VEGF濃度>2000pg/ml時,應(yīng)在試管中將樣品用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目,并增加1孔作為TMB空白顯色孔??倲?shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2. 將1000pg/ml ,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于人血清、體液、組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清,每孔先加50μι樣品稀釋液,再加50μι樣品。
3. 酶標板加上蓋,37℃反應(yīng)120分鐘。
4. 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體(將自動洗板機的洗滌次數(shù)設(shè)為零再開始即可);或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。不洗。
5. 將準備好的*抗人VEGF抗體工作液按每孔0.1ml依次加入(TMB空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng)60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。吸去或甩去多余液體。
7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入(TMB空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。吸去或甩去多余液體。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色液,37℃避光反應(yīng)20-25分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯)。
10. 按每孔0.1ml依次加入TMB終止液,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。
11. 用酶標儀在450nm測定O.D.值,將TMB空白顯色孔設(shè)為對照。
12. 所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,在坐標紙上畫出曲線,以吸光值作為縱坐標,以濃度作為橫坐標。
13. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算(下載)。應(yīng)記住由于樣品稀釋了1倍,其實際濃度應(yīng)該×2。
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品發(fā)布:
Anti-GAPDH(mouse Anti-GAPDH Monoclonal) |
Anti-β-Actin |
Anti-14-3-3 protein |
Anti-14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris)) |
Anti-2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) |
Anti-2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) |
Anti-5-HT(5-hydroxytryptamine) |
Anti-5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A) |
Anti-5-HTR1B (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1B) |
Anti-5-HTR2B(5-hydroxytryptamine(serotonin)receptor 2B) |
Anti-5-HTR2A |
Anti-5-HTT/SERT(Serotoninreuptake transporter) |
Anti-5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) |
Anti-5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4) |
Anti-5-LOX (5-lipoxygenase) |
Anti-8-OHdG(8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine; 8-Hydroxydeoxyguanosine) |
Anti-A2AR/Adenosine A2A-R(A2A adenosine receptor) |