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技術(shù)文章

狗外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書

閱讀:194發(fā)布時(shí)間:2015-6-8

狗外周血淋巴細(xì)胞分離液
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:狗外周血淋巴細(xì)胞分離液
狗外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書【預(yù)期用途】
適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞),無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。
狗外周血【檢驗(yàn)原理】
外周血中單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和白細(xì)胞等細(xì)胞密度較大,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 1.075~1.090 g/ml,血小板為 1.030~1.035 g/ml。為此,本公司將葡聚糖(右旋糖酐)和**按一定比例混合,調(diào)整比重、pH 值和滲透壓,經(jīng)過澄清及除菌過濾后制成一種密度在 1.077g/ml 并且近于等滲的溶液(分層液),經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
【檢驗(yàn)方法】
取新鮮抗凝血 1ml,與注射用生理鹽水 1:1 混勻后,小心加于 2ml 的細(xì)胞分離液之液面上,以 400g 離心(半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子)20 分鐘,此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含注射用生理鹽水 4-5毫升的試管中,充分混勻后, 400g,離心 20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗 2 次即得所需細(xì)胞。(此方法效果較好,推薦使用)
狗外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書【主要組成成份】
本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液,主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與**。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25℃避光保存,有效期 2 年。啟封后置 4℃保存,有效期 1 周。本品為真空包裝,未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【適用儀器】
 半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)。
【樣本要求】
本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,血液收集時(shí)應(yīng)無菌操作且在儲(chǔ)存、處理和運(yùn)輸過程中避免冷凍和冷藏。
【參考值(參考范圍)】
收集淋巴細(xì)胞的純度大于 80%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
本試驗(yàn)要求,在正常大氣壓下,樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 20℃± 2℃。
本分離液在低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
密度 1.077 ± 0.001g/ml
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
400g,離心
20 分鐘
內(nèi)毒素 <0.06EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 20 粒以下,含 25μm 以上的不溶性微粒 5 粒以下
【注意事項(xiàng)】
1. 狗外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書啟封后應(yīng)置 4℃保存,避免微生物的污染。
2. 細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,需待溶液溫度升至室溫時(shí),搖勻后使用。
3. 整個(gè)分離過程中,溫度應(yīng)控制在 20℃± 2℃且在無菌環(huán)境下進(jìn)行,避免微生物的污染,否則會(huì)影響分離質(zhì)量。


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