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上海酶聯(lián)生物研究所

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半價(jià)大腸桿菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

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本試劑盒僅供研究使用。
96T

大腸桿菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的:
本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 大腸桿菌(E.coli)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中 大腸桿菌(E.coli)表達(dá)。用純化的 大腸桿菌(E.coli)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中 大腸桿菌(E.coli)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的 大腸桿菌(E.coli)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中 大腸桿菌(E.coli)的存在與否。
試劑盒組成 

大腸桿菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求 
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)


2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):

計(jì)算和結(jié)果判定:
  試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為 大腸桿菌(E.coli)陰性
  陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為 大腸桿菌(E.coli)陽性
。 
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
大腸桿菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

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