在試驗條件（包括ELISA試劑盒）較難確保穩(wěn)定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是病人（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測定所沿襲。
ELISA試劑盒實際上每一測定體系應(yīng)該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是ELISA試劑盒，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。
因而，這類ELISA試劑盒規(guī)則，如N<0.05（或別的數(shù)值），則按0.05核算，不然將呈現(xiàn)假陽性成果。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA試劑盒板只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時刻。為確保這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。