Hs68 細胞
細胞介紹
該細胞 1969 年由 Owens RB 建立。
細胞特性
1  來源：人正常
2  形態(tài) ：成纖維細胞樣，貼壁生長
3  含量：>1x10 6 個/mL
4  污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5  規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝運輸和保存 ：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

Hs68 細胞
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基 及 培養(yǎng) 凍存 條件準備：
1）準備 D/F12 培養(yǎng)基(D/F12，GIBCO，貨號 C11330500BT)；北美胎牛血清(UnitedStates，GIBCO，貨號 16000-044)，20%；雙抗 1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞 處理 ：
1） 復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)或?qū)⒓毎麘乙杭尤?10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

Hs68 細胞
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面 T25 瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml *，細胞變圓脫落后，加入 2ml *培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加 DMSO 至zui終濃度為10%。加入 DMSO 后迅速混勻，按每 1ml 的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于 1X10 6 個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。