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上海通蔚生物科技有限公司

讓您對ELISA實(shí)驗(yàn)的成功勢在必得

時間:2015-5-26閱讀:121
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ELISA的原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 


ELISA操作步驟:

1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條,未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實(shí)自封條,密封口袋,放回4℃。
2.空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液,其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔),用封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育90分鐘。
3.提前20分鐘準(zhǔn)備*化抗體工作液。
4.洗板5次。
5.空白孔加*化抗體稀釋液,其余孔加入*化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育60分鐘。
6.提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7.洗板5次。
8.空白孔加酶結(jié)合物稀釋液,其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱,避光孵育30分鐘。
9.打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
10.洗板5次。
11.加入顯色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鐘。
12.加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。
13.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。
建議保存酶標(biāo)板框,以備下次或者今后試驗(yàn)使用。

ELISA注意事項(xiàng)    

正式試驗(yàn)時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

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