為感謝廣大客戶*以來對我公司的支持與厚愛，感謝新老客戶選擇我公司的ELISA試劑盒產(chǎn)品，特此我公司技術人員為大家*、專業(yè)提供ELISA實驗經(jīng)驗。以下是我公司技術人員總結出的小經(jīng)驗供大家參考：

1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，前輩嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素*:先親和素先包被載體，加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗具體來實踐。

4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大（當然有條件的用洗板機除外），洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。

5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費，太低則著色淺。

6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉。

7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。

我公司主營生物試劑、標準品、試劑盒、培養(yǎng)基、血清、細胞、細胞因子、抗體等，有任何問題歡迎廣大客戶！

96T  檢測84個樣本，12孔用于繪制標準曲線

48T  檢測42個樣本，6孔用于繪制標準曲線

我們對客戶的承諾：

1.有質(zhì)量問題免費包換.（質(zhì)量問題包括運輸不當，客戶在使用過程中測不出結果，等等?。?/p>

2.全程技術指導。（包括售前的標本收集，使用過程中不明白的地方，實驗結束后的數(shù)據(jù)分析，有任何疑問，我們技術都會即時給你去電）

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