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上海通蔚生物科技有限公司

我司為大家專業(yè)提供ELISA的經(jīng)驗

時間:2015-6-11閱讀:434
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為感謝廣大客戶*以來對我公司的支持與厚愛,感謝新老客戶選擇我公司的ELISA試劑盒產(chǎn)品,特此我公司技術人員為大家*、專業(yè)提供ELISA實驗經(jīng)驗。以下是我公司技術人員總結出的小經(jīng)驗供大家參考:

1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時,前輩嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白,對于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,我把方法簡要的列出如下:①親和素*:先親和素先包被載體,加入*化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱冷風吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇,一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理:由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉:繼包被之后用高濃度的無關蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么,要依據(jù)試驗具體來實踐。

4、洗滌板:可以說在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,為達到分離游離的和結合的酶標記物的目的,清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差,人為因素很大(當然有條件的用洗板機除外),洗的不*或串了孔,對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。

5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋,也可用封閉液去稀釋。如需加二抗,還要注意二抗的工作濃度,太高浪費,太低則著色淺。

6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多,我們一開始做的時候,要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵,AP結合物可加疊氮鈉。

7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好,如出現(xiàn)問題也好分析。

我公司主營生物試劑、標準品、試劑盒、培養(yǎng)基、血清、細胞、細胞因子、抗體等,有任何問題歡迎廣大客戶!

96T  檢測84個樣本,12孔用于繪制標準曲線

48T  檢測42個樣本,6孔用于繪制標準曲線

我們對客戶的承諾:

1.有質(zhì)量問題免費包換.(質(zhì)量問題包括運輸不當,客戶在使用過程中測不出結果,等等?。?/p>

2.全程技術指導。(包括售前的標本收集,使用過程中不明白的地方,實驗結束后的數(shù)據(jù)分析,有任何疑問,我們技術都會即時給你去電)

3.提供免費代測的服務。(你只需把標本寄過來,我們?yōu)槟愎?jié)省時間,幫你出結果,原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù)均可提供,一般時間是5天左右)

4.客戶有任何問題,我們都是在一個工作日之內(nèi)給出解決方案。售后和技術這一塊都是竭誠為客戶服務

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