一、原理：
ELISA試劑盒抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清，一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。
一種抗原能否引起抗體生成反應(yīng)，一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定（Antigenicdeterminant），另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，當(dāng)具備以上兩個條件后，抗體生成將遵循抗體生成的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)。
抗原的種類繁多，包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫動物具有不同的特殊性。一般*抗原免疫動物需加用佐劑，尤其在使用可溶性抗原時，以期得到價的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物質(zhì)需先通過人工的方法與蛋白質(zhì)載體連接后再與佐劑混合免疫動物，方可獲得理想的免疫效果。使用佐劑后可增加抗原的免疫原性和延長抗原在機(jī)體內(nèi)存留的時間，從而改變了抗原原有的免疫原性。

二、目的：
1、了解抗血清制備的基本過程：
2、掌握抗血清的收集和保存方法。

三、材料：
1、金屬編號牌（對動物作標(biāo)記錄）或染料;
2、1毫升，5毫升、20毫升注射器;
3、*頭（9#，12#），卡價苗針頭（41/2# — 51/2#）;
4、滅菌平皿，疫苗瓶，*瓶，皮塞以及吸管，脫脂棉;
5、卡介苗（75mg/ml）;
6、抗原（小鼠血清）;
7、*溶液，*溶液和5%葡萄糖溶液;
8、液體石臘（醫(yī)用），羊毛臘（配制佐劑用）;
9、滅菌生理鹽水，消毒用酒精，2.5%碘酒;
10、1.5%瓊脂，玻板，飯盒（保濕、保濕作用）;
11、實(shí)驗(yàn)動物（家兔）。
12、分離血清
必須在無菌條件下進(jìn)行，待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后，用無菌滴管在無菌環(huán)境（例如超凈工作臺）中把血塊與瓶壁剝離后，放入37℃，1～2h取出后放入4℃，使血清充分析出（不能冰凍，否則產(chǎn)生溶血），經(jīng)離心沉淀分出血清，放進(jìn)低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?br>13、ELISA試劑盒抗血清的保存
1）經(jīng)簽定合格后的抗血清，以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的疊氮鈉，使其zui后濃度分別為0.01%或0.05%。
2）用無菌滴管將抗血清分裝小管，每管裝1ml左右。
3）-20℃以下保存，可保存2年以上。
4）如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下，保存時間更久

四、注意事項(xiàng)
1、動物的免疫反應(yīng)存在著個體差異，甚至有人報告不同品種動物一次免疫后產(chǎn)生的抗體的差別可高達(dá)500倍，所以制備抗血清時不能只免疫一只動物，一般免疫3～4只，因?yàn)橛械膭游锟赡墚a(chǎn)生抗體效價很低或不產(chǎn)生抗體，免疫反應(yīng)好的動物所能提供的抗體往往高于一般動物3～4倍。
2、為制備單價特異性高的抗血清，所用抗原純度越高越好，因此，在純化抗原過程中應(yīng)盡量除去可能存在的雜蛋白，這樣可以省去許多時間來吸收抗血清中的非特異性抗體。
3、要制備價的抗體，必須要加佐劑（一般采用*福氏佐劑），加佐劑后免疫動物，抗體效價至少可增加5倍。但也應(yīng)考慮到，如果抗原中有微量的雜蛋白存在，即使0.005mg，亦可因有佐劑而產(chǎn)生非特異性的抗體，所以要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和抗原的純度適當(dāng)?shù)厥褂米魟?br>4、制成的抗原乳劑是否為油包水乳劑應(yīng)進(jìn)行檢查，否則會影響免疫效果，如不是油包水乳劑，應(yīng)重新制備。
5、當(dāng)抗原量過少不易提純時，可采用抗原抗體在瓊脂擴(kuò)散中形成的沉淀線直接免疫動物制備抗體。
6、ELISA試劑盒抗血清效價一般以抗血清稀釋倍數(shù)表示。血清效價的檢測方法很多，靈敏度各不同，因此在表示抗血清效價時，應(yīng)標(biāo)明檢測方法。另外，在沉淀反應(yīng)中，出現(xiàn)沉淀時的抗原、抗體比例有一較大的范圍，如用不同濃度的抗原測定效價時，結(jié)果會因此有別，所以在測定抗血清效價時，需注意抗原的濃度。
7、分裝保存的抗血清應(yīng)注明抗血清的名稱，效價，制備日期以及包裝量。