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當(dāng)前位置:上海通蔚生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>ELISA試劑盒抗血清制備目的
一、原理:
ELISA試劑盒抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。
一種抗原能否引起抗體生成反應(yīng),一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定(Antigenicdeterminant),另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài),當(dāng)具備以上兩個條件后,抗體生成將遵循抗體生成的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)。
抗原的種類繁多,包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫動物具有不同的特殊性。一般*抗原免疫動物需加用佐劑,尤其在使用可溶性抗原時,以期得到價的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物質(zhì)需先通過人工的方法與蛋白質(zhì)載體連接后再與佐劑混合免疫動物,方可獲得理想的免疫效果。使用佐劑后可增加抗原的免疫原性和延長抗原在機(jī)體內(nèi)存留的時間,從而改變了抗原原有的免疫原性。
二、目的:
1、了解抗血清制備的基本過程:
2、掌握抗血清的收集和保存方法。
三、材料:
1、金屬編號牌(對動物作標(biāo)記錄)或染料;
2、1毫升,5毫升、20毫升注射器;
3、*頭(9#,12#),卡價苗針頭(41/2# — 51/2#);
4、滅菌平皿,疫苗瓶,*瓶,皮塞以及吸管,脫脂棉;
5、卡介苗(75mg/ml);
6、抗原(小鼠血清);
7、*溶液,*溶液和5%葡萄糖溶液;
8、液體石臘(醫(yī)用),羊毛臘(配制佐劑用);
9、滅菌生理鹽水,消毒用酒精,2.5%碘酒;
10、1.5%瓊脂,玻板,飯盒(保濕、保濕作用);
11、實(shí)驗(yàn)動物(家兔)。
12、分離血清
必須在無菌條件下進(jìn)行,待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后,用無菌滴管在無菌環(huán)境(例如超凈工作臺)中把血塊與瓶壁剝離后,放入37℃,1~2h取出后放入4℃,使血清充分析出(不能冰凍,否則產(chǎn)生溶血),經(jīng)離心沉淀分出血清,放進(jìn)低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?br>13、ELISA試劑盒抗血清的保存
1)經(jīng)簽定合格后的抗血清,以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的疊氮鈉,使其zui后濃度分別為0.01%或0.05%。
2)用無菌滴管將抗血清分裝小管,每管裝1ml左右。
3)-20℃以下保存,可保存2年以上。
4)如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下,保存時間更久
四、注意事項(xiàng)
1、動物的免疫反應(yīng)存在著個體差異,甚至有人報告不同品種動物一次免疫后產(chǎn)生的抗體的差別可高達(dá)500倍,所以制備抗血清時不能只免疫一只動物,一般免疫3~4只,因?yàn)橛械膭游锟赡墚a(chǎn)生抗體效價很低或不產(chǎn)生抗體,免疫反應(yīng)好的動物所能提供的抗體往往高于一般動物3~4倍。
2、為制備單價特異性高的抗血清,所用抗原純度越高越好,因此,在純化抗原過程中應(yīng)盡量除去可能存在的雜蛋白,這樣可以省去許多時間來吸收抗血清中的非特異性抗體。
3、要制備價的抗體,必須要加佐劑(一般采用*福氏佐劑),加佐劑后免疫動物,抗體效價至少可增加5倍。但也應(yīng)考慮到,如果抗原中有微量的雜蛋白存在,即使0.005mg,亦可因有佐劑而產(chǎn)生非特異性的抗體,所以要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和抗原的純度適當(dāng)?shù)厥褂米魟?br>4、制成的抗原乳劑是否為油包水乳劑應(yīng)進(jìn)行檢查,否則會影響免疫效果,如不是油包水乳劑,應(yīng)重新制備。
5、當(dāng)抗原量過少不易提純時,可采用抗原抗體在瓊脂擴(kuò)散中形成的沉淀線直接免疫動物制備抗體。
6、ELISA試劑盒抗血清效價一般以抗血清稀釋倍數(shù)表示。血清效價的檢測方法很多,靈敏度各不同,因此在表示抗血清效價時,應(yīng)標(biāo)明檢測方法。另外,在沉淀反應(yīng)中,出現(xiàn)沉淀時的抗原、抗體比例有一較大的范圍,如用不同濃度的抗原測定效價時,結(jié)果會因此有別,所以在測定抗血清效價時,需注意抗原的濃度。
7、分裝保存的抗血清應(yīng)注明抗血清的名稱,效價,制備日期以及包裝量。
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