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上海通蔚生物科技有限公司

ELISA試劑盒分析蛋白純化方法

時間:2015-11-2閱讀:125
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      蛋白能溶于水是因為其表面有親水性氨基酸,ELISA試劑盒在蛋白質(zhì)的等電點處若溶液的離子強度特別高或者特別低,蛋白則傾向于從溶液中析出。硫 酸銨是沉淀蛋白zui常用的鹽,因為它在冷的緩沖液中溶解性好,冷的緩沖液有利于保持目的蛋白的活性。硫 酸銨分餾常用作試驗室蛋白純化的*步,它可以初步粗提蛋白質(zhì),去除非蛋白成分。蛋白質(zhì)在硫 酸銨沉淀中較穩(wěn)定,可以短期在這種狀態(tài)下保存中間產(chǎn)物,當(dāng)前蛋白質(zhì)純化多采用這種辦法進行粗分離翻。ELISA試劑盒在規(guī)模化生產(chǎn)上硫 酸銨沉淀方法仍存在一些問題,硫 酸銨對不銹鋼器具的腐蝕性很強。其他的鹽如硫 酸鈉不存在這種問題,但其純化效果不如硫 酸銨。                                            除了鹽析外蛋白還可以用多聚物如PEG和防凍劑沉淀出來,PEG是一種惰性物質(zhì),同硫 酸銨一樣對蛋白有穩(wěn)定效果,ELISA試劑盒在緩慢攪拌下逐漸提高冷的蛋白溶液中的PEG濃度,蛋白沉淀可通過離心或過濾獲得,蛋白可在這種狀態(tài)下*保存而不損壞。蛋白沉淀對蛋白純化來說并不是多么好的方法,因為它只能達到幾倍的純化效果,而我們在達到目的前需要上千倍的純化。其好處是可以把蛋白從混雜有蛋白酶和其他有害雜質(zhì)的培養(yǎng)基及細(xì)胞裂解物中解脫出來。

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