研制的通用ELISA試劑盒為PRRSV臨床血清抗體檢測及流行病學(xué)調(diào)查提供了技術(shù)手段。該試劑盒對350份臨床疑似血清檢出率為88.6%。擴(kuò)大誘導(dǎo)培養(yǎng),收集菌體,提取包涵體,用GST-Protein Purtification Kit親和層析純化目的蛋白,SDS-PAGE電泳檢測純度達(dá)到90%以上,可知足診斷抗原質(zhì)量要求。ELISA試劑盒批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.44%～6.34%和5.04%～7.64%。優(yōu)化后抗原zui適包被質(zhì)量濃度為2.5mg/L;血清zui適稀釋度為1∶100;對血清樣本檢測臨界值為0.224;通用ELISA試劑盒特異性為95%,敏感性為90%;與豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病病毒、豬乙型腦炎病毒、豬圓環(huán)病毒、豬瘟病毒等常見豬繁殖障礙病尺度陽性血清無交叉反應(yīng)。

    用純化PRRSV重組核衣殼蛋白GST-N為包被抗原,建立檢測PRRSV血清的間接ELISA診斷方法,并組裝ELISA試劑盒。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值比擬較，從而判斷標(biāo)本中牛支原體的存在與否。此外,3種試劑盒對牛傳染性肋膜肺炎尺度血清(PS2)的檢測結(jié)果顯示HVRI通用ELISA試劑盒和Kit 1均為為陰性,Kit 2為陽性。因此,HVRI試劑盒與Kit 1更適于M.bovis檢測和開展流行病學(xué)調(diào)查。用純化的牛支原體抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中支原體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的支原體抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)由*洗滌后加底物TMB顯色。