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上海一研生物科技有限公司

細胞凋亡形態(tài)學觀察方法

時間:2015-12-2閱讀:347
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一、形態(tài)學觀察方法

1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質(zhì)濃縮,染色質(zhì)成團塊狀,細胞表面有“出芽"現(xiàn)象。

2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。

3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區(qū)別壞死細胞有一定的幫助。

4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質(zhì)緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出“芽"及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現(xiàn)象。

二、DNA凝膠電泳

(一)、檢測原理

    細胞發(fā)生凋亡或壞死,其細胞DNA均發(fā)生斷裂,細胞內(nèi)小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現(xiàn)180-200bpDNA片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區(qū)別。

(二)結(jié)果判斷

    正?;?a data-cke-saved-href="http://www.niunang.cn/st154685/list_659452.html" href="http://www.niunang.cn/st154685/list_659452.html">細胞DNA 電泳出現(xiàn)階梯狀(LADDER)條帶;壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續(xù)性條帶。

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