我們將噬菌體展示技術(shù)和蛋白酶解（proteolysis）相結(jié)合，從蛋白質(zhì)—噬菌體混合物和文庫(kù)中篩選出穩(wěn)定折疊的變異體。該方法的前提是不穩(wěn)定的和（或）部分折疊的蛋白質(zhì)應(yīng)該比穩(wěn)定折疊的蛋白質(zhì)對(duì)蛋白酶的酶切更加敏感，將這與噬菌體展示技術(shù)相結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)如后所述的篩選。目標(biāo)蛋白在N端用*標(biāo)簽標(biāo)記，然后在C端與噬菌體少數(shù)衣殼蛋白pⅢ融合后在噬菌粒載體中被表達(dá)出來(lái)，形成單價(jià)展示。

我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的蛋白酶篩選方法的原理：
展示了蛋白質(zhì)的噬菌體通過(guò)N端的*標(biāo)簽與鎳基質(zhì)結(jié)合（步驟1）；

用蛋白酶處理結(jié)合后的噬菌體，展示了對(duì)蛋白酶作用敏感的蛋白質(zhì)的噬菌體被從基質(zhì)上切除，并被洗滌下來(lái)（步驟2）；

然后從鎳基質(zhì)上將展示了蛋白質(zhì)的、能抵抗蛋白酶作用并因此保持與基質(zhì)結(jié)合的噬菌體洗脫下來(lái)（步驟3）；

將這些噬菌體擴(kuò)增，以供進(jìn)一步的篩選或DNA序列測(cè)定（步驟4） 用噬菌體展示進(jìn)行蛋白酶篩選的兩種方法的對(duì)比：

（a）我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的基于親和性的方法；

（b）Plackthun/Schmid小組和Winter小組描述的將蛋白質(zhì)的酶解和噬菌體的感染力相結(jié)合的方法