熱引導的抗原決定簇修復（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）對大多數的抗體有益，尤其是對核抗原的修復作用更加明顯，zui常用的抗原修復液是pH6.0的枸櫞酸緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液，它們的作用原理是通過鈉離子的螯合而實現的。抗原修復液的PH值非常重要，有效的抗原修復pH值要比修復液的化學成分更重要，同樣的修復液隨著PH值的升高染色的強度逐漸增強，但*PH值范圍為6.0~10.0，對于大多數抗原這個范圍的pH值都能進行有效的修復，有些抗體（如Ki-67、ER）則在PH值l.0~3.0和6.0~8.0更為有效。作為通用修復液堿性pH值的修復液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織，酸性pH值的修復液則優(yōu)于堿性的修復液，所以兩種抗原修復液可作為相互替補的進行抗原修復。在進行HIER過程中應防止切片的干燥，加熱時必須達到規(guī)定的溫度，保溫時間要足夠，對于一些不要抗原修復的抗體不要采用HIER處理，否則對染色無益，但有些抗體則需要利用多種修復聯合應用。HIER方法有：

（1）水浴加熱法  將脫蠟人水后的切片放人盛有修復的容器中，放人加熱煮沸水中，當修復液溫度達到95℃左右時計時l5min，自然冷卻，PBS洗3min×3次。

（2）微波加熱法  將切片放入修復液中微波加熱使溫度在96℃左右，計時l0min，在微波爐中停留2min，室溫自然冷卻，PBS洗3min×3次。

（3）高壓加熱法  將修復液在高壓鍋中煮沸，切片插在染色架上，放入鍋中（要使修復液淹沒切片）開始噴氣時蓋上壓力閥。計時2min，冷水沖至室溫取出切片，PBS洗3min×3次。抗體