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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司

質(zhì)體DNA 酵解反應(yīng)與洋菜膠體電泳分析方法步驟

時(shí)間:2015-7-1閱讀:423
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方法步驟:
1) 取兩支1.5 mL微離心管,分別標(biāo)示為 #1 與 #2 的后,依下表所順序,ELISA試劑盒
逐一加入酵解反應(yīng)所需各項(xiàng)物質(zhì) (體積單位為 μL)。注意:應(yīng)等所有成份加的后,再加入限制酶。

2) 以手指頭輕彈微離心管,以均勻混合管中各項(xiàng)物質(zhì)。

3) 離心數(shù)秒后,放置于37℃恒溫水槽作用1~2 h。

4) 請(qǐng)用這一段時(shí)間參照『基本操作技術(shù)』所描述的步驟準(zhǔn)備一片1.2%洋菜膠體。
 Ethidium bromide 是強(qiáng)致癌物質(zhì),嚴(yán)禁戴著手套到處摸!

5) 自恒溫水槽取出微離心管,離心數(shù)秒后暫存冰中備用。

6) 擬進(jìn)電泳分析時(shí),請(qǐng)拿出3 支1.5 mL 微離心管,分別標(biāo)示為 #1, #2與 #3,并依下表所示在各離心管逐一加入適?的DNA 與10×追蹤染劑(體積單位為 μL)。ELISA試劑盒

7) 把膠片移至電泳槽,注入適電泳緩沖液,以微移液器P20 逐一將樣本
吸入注出數(shù)次使混合均勻,并小心注入膠片的樣本槽中。

8) 接好電極線以定電壓100 V 進(jìn)電泳,待追蹤染劑移動(dòng)至膠體三分的二處時(shí),關(guān)閉電源,將膠體移至UV transilluminator box,以拍得相機(jī)拍照 。

 DNA泳動(dòng)方向?yàn)?(-) 向 (+)。 此外,在UV transilluminator box上直接觀察DNA色帶時(shí),沒(méi)戴眼鏡的同學(xué)應(yīng)戴上護(hù)目鏡或面罩,以避免UV灼傷;含有ethidium bromide的洋菜膠體請(qǐng)丟至容器中!ELISA試劑盒


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