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β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)酶聯(lián)免疫試劑盒使用方法

閱讀:164發(fā)布時(shí)間:2016-04-20

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檢測范圍:                                                               96T

5U/L - 150U/L

使用目的:

    本試劑盒用于測定牛奶樣本中β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)水平。用純化的β內(nèi)酰

胺酶(β-lactamase)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入β內(nèi)酰胺

(β-lactamase),再與HRP 標(biāo)記的β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)

抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并

在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)呈正相

關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中β內(nèi)酰胺酶(β

-lactamase)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1  7 終止液 6ml×1

2 酶標(biāo)試劑 6ml×1  8 標(biāo)準(zhǔn)品(240U/L 0.5ml×1

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8  9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1

4 樣品稀釋液 6ml×1  10 說明書 1

5 顯色劑A  6ml×1  11 封板膜 2

6 顯色劑B  6ml×1/ 12 密封袋 1 個(gè)

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

120U/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60U/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30U/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15U/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5U/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,

然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此

重復(fù)5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


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