人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)elisa試劑盒實驗條件選擇

血小板衍生生長因子（Platelet derived growth factor，PDGF）是貯存于血小板α顆粒中的一種堿性蛋白質(zhì)。是低分子量促細胞分裂素。能刺激停滯于G0/G1期的成纖維細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、平滑肌細胞等多種細胞進入分裂增殖周期。血小板衍生生長因子PDGF于1974年發(fā)現(xiàn)的一種刺激結(jié)締組織等組織細胞增長的肽類調(diào)節(jié)因子，因其來源于血小板而得名，正常生理狀態(tài)下存在于血小板的α顆粒內(nèi)，當血液凝固時由崩解的血小板釋放出來并且被激活，具有刺激特定細胞趨化與促進特定細胞生長的生物活性。此外，在組織受到損傷時巨噬細胞、血管平滑肌細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、胚胎干細胞等也可以合成并釋放PDGF。肝臟受損時，巨噬細胞、血小板、浸潤的炎細胞、受損的內(nèi)皮細胞及激活的肝星形細胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式發(fā)揮作用。結(jié)合的PDGF是分子量為30KD的熱穩(wěn)定糖蛋白，是靠二硫鍵相連的A、B兩條多肽鏈組合成的二聚體。

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

　?。?） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

　?。?）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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