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南京信帆生物技術(shù)有限公司
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大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)

時(shí)間:2017/4/18閱讀:981
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大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒簡(jiǎn)介

    群體反應(yīng)性抗體(panel reactive antibodies,PRA)是指大鼠腎素,是各種組織器官移植術(shù)前篩選致敏受者的重要指標(biāo),與移植排斥反應(yīng)和存活率密切相關(guān)。腎素(renin)是腎小球旁器(也稱球旁復(fù)合體)的球旁細(xì)胞釋放的一種蛋白水解酶。腎素、血管緊張素、醛固酮三者是一個(gè)相連的作用系統(tǒng),稱為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)。腎素釋放受多方面因素的調(diào)節(jié),當(dāng)動(dòng)脈血壓降低,循環(huán)血量減少時(shí),交感神經(jīng)興奮,致密斑感受器興奮,入球小動(dòng)脈的血壓和血流量均減少,對(duì)入球小動(dòng)脈的牽張刺激減弱,激活了管壁的牽張感受器,促進(jìn)球旁細(xì)胞釋放腎素。同時(shí),腎小球?yàn)V過(guò)率隨腎血流量減少而減少,流過(guò)致密斑的鈉離子濃度減少,致密斑被激活,轉(zhuǎn)而促進(jìn)球旁細(xì)胞釋放腎素。球旁細(xì)胞受交感神經(jīng)支配,交感神經(jīng)興奮,增加腎素釋放。

信帆生物產(chǎn)品大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒樣本處理注意事項(xiàng)

    收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,請(qǐng)?jiān)炷H〔暮?,將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。

具體樣本的處理和要求如下:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

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