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南京信帆生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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有人用過T細(xì)胞亞群試劑盒嗎,是由哪些試劑組成的?

時(shí)間:2018/11/8閱讀:1989
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有人用過T細(xì)胞亞群試劑盒嗎,是由哪些試劑組成的?

 

T淋巴細(xì)胞亞群的檢測是細(xì)胞免疫檢測的新指標(biāo)之一。隨著抗T細(xì)胞單克隆抗體的問世及各種檢測方法的建立。 T淋巴細(xì)胞亞群檢測已經(jīng)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。

T淋巴細(xì)胞及其分類主要應(yīng)用抗T細(xì)胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面分化抗原將成熟T細(xì)胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群,T淋巴細(xì)胞的功能與表現(xiàn)型之間的對應(yīng)關(guān)系是相對的,其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響,并受MHC抗原的制約,許多研究證明,CD4+T細(xì)胞具有殺傷活性,介導(dǎo)Ι類抗原不相容時(shí)的靶細(xì)胞溶解。TU等研究表明,CD4+的細(xì)胞毒活性存在兩種*不同的機(jī)理,并證明TH1和TH2的細(xì)胞毒活性不同。前者強(qiáng),后者弱或無活性。Dennert等發(fā)現(xiàn),克隆化的T淋巴細(xì)胞具有輔助,細(xì)胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)作用,這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細(xì)胞識(shí)別Ⅱ類MHC抗原,其效應(yīng)的發(fā)揮也受Ⅱ類抗原的制約;CD8+細(xì)胞識(shí)別Ι類MHC抗原,發(fā)揮免疫效應(yīng)也受其控制。

 

1防脫片劑2ml
2固定液10ml
3A小鼠抗人CD3單抗1ml
 B小鼠抗人CD4單抗1ml
 C小鼠抗人CD8單抗1ml
4生物素標(biāo)記羊抗小鼠IgG( IgG/Bio)1.5ml × 2
5堿性酶標(biāo)記鏈霉卵白素(S-A/AP)1.5ml × 2
6A底物增強(qiáng)劑( 40×)200μl
 B底物液( 40× )200μl
 C底物緩沖液( 10× )800μl
7細(xì)胞核復(fù)染液5ml
8封片劑1ml
9記號(hào)筆1支
10PBS2包(1000ml)
T細(xì)胞亞群檢測試劑盒

標(biāo)本染色:


1. 充分干燥(室溫2小時(shí)以上或過夜)的細(xì)胞涂片先用記號(hào)筆在標(biāo)本外畫圈,然后滴加固定液50μl,室溫靜置2-3分鐘,用PBS淋洗,擦干玻片背面及細(xì)胞外的PBS。
*以下反應(yīng)均需在濕盒中進(jìn)行。
2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8單抗適量(10-30μl), 4℃過夜,PBS淋洗3次。
3. 滴加生物素標(biāo)記抗小鼠IgG適量(10-30μl),37℃孵育30-45分鐘,PBS淋洗3次。
4. 滴加堿性酶標(biāo)記鏈霉卵白素適量(10-30μl)37℃孵育30-45分鐘,PBS淋洗3次。
5. 滴加顯色劑30-50μl,室溫顯色20-40分鐘??稍陲@微鏡下觀察,待細(xì)胞膜上出現(xiàn)紅色標(biāo)記物時(shí),用PBS淋洗。
6. 滴加細(xì)胞核復(fù)染液30-50μl,30秒后自來水淋洗。
7. 滴加封片劑,蓋片封片,鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。
標(biāo)本制備:取肝素抗凝(25μl/ml)的靜脈血1~2ml,PBS稀釋1-2倍后,沿裝有等量淋巴細(xì)胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層,保持兩種液體界面清晰,離心(2000轉(zhuǎn)/分)15-20分鐘,吸取兩液面交界處的單個(gè)核細(xì)胞層,加5倍PBS,離心(1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,棄上清液,沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流液體(約一滴)混勻細(xì)胞,制成單個(gè)核細(xì)胞懸液。滴30μl細(xì)胞懸液于載玻片上,靜置2分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上,吸去液體,快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干?;蛴肞BS將單個(gè)核細(xì)胞調(diào)至2×105個(gè)/ml,離心涂片機(jī)1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片,快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl均勻推片,亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上,待干后制備細(xì)胞涂片,以防掉片。
觀  察:高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù)100-200個(gè)單個(gè)核細(xì)胞,細(xì)胞表面有紅色標(biāo)記物為陽性細(xì)胞。算出陽性率。
正常參考值:正常人外周血中,陽性細(xì)胞百分率一般在:CD3,60-80%;CD4,35-55%;CD8,20-30%;CD4/CD8的比值在1.5-2.0范圍內(nèi)。

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