檢測食品中蛋白質(zhì)的含量！
1) 原理
1976年由Bradford建立的考馬斯亮藍(lán)法，是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的。這種方法是目前靈敏度高的蛋白質(zhì)測定方法之一。
考馬斯亮藍(lán)G-20染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料大吸收峰位置，由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。染料主要是與蛋白質(zhì)中堿性氨基酸和芳香氨基酸殘基結(jié)合。
在595nm下測定的吸光度A595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。
特點(diǎn)
(1)靈敏度高
其罪低檢測蛋白質(zhì)含量可達(dá)1mg，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料相結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的吸光系數(shù),因而光吸收要比Folin –酚試劑法大得多。
(2) 測定快速，簡潔
只需要加一種試劑.完成一個(gè)樣品的測定，只要5分鐘左右 。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程，大約只要2分鐘即可完成，其顏色可以在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定，且在5分鐘至20分鐘之間，顏色的穩(wěn)定性好。
(3) 干擾物質(zhì)少。
缺點(diǎn)
(1) 由于各種蛋白質(zhì)中的精安酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此 Bradford 法用于不同蛋白質(zhì)時(shí)有較大的偏差 。
(2) 仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定，主要的干擾物質(zhì)有去污劑等。
(3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線形，因而不能用比爾定律進(jìn)行計(jì)算而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定未知蛋白質(zhì)的濃度。
操作方法
1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
?、?吸標(biāo)樣：吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于10m1作好標(biāo)記的試管中。
?、?加蒸餾水：吸取1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0.0ml蒸餾水分別加入加有0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)使用液的試管中。
③ 加顯色劑：于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入5.0m1考馬斯亮藍(lán) G- 250 試劑。
?、?混溶比色：加水至刻度，混勻，靜置2min，于波長595nm處測吸光度。
?、?繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以牛血清白蛋白含量(ug)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品中蛋白質(zhì)含量的測定
另取 1 支試管，準(zhǔn)確量取 1.00ml 樣品提取液，再加入5ml 考馬斯亮藍(lán) G- 250 試劑，充分混合，放置 2min 后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線 1 號(hào)試管做參比，在 595 nm 波長下比色，記錄吸光度
