肺腺鱗癌（adnosqumous cell carcinoma, ASC）屬于非小細(xì)胞肺癌中預(yù)后較差的一種，以鉑類為基礎(chǔ)的*藥物一直以來都是ASC的主要治療手段。隨著針對腫瘤內(nèi)基因變異產(chǎn)生的個體治療方案，例如使用*激酶抑制劑或者ALK抑制劑；以及免疫監(jiān)測點阻斷治療方法的研發(fā)，例如近年來FDA在美國批準(zhǔn)的程序性死亡因子1（PD-1）抗體藥物pembrolizumab，使得非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的治療有了更多的選擇用藥方案。PD-1以及其配體PD-L1屬于免疫監(jiān)測點蛋白，分別在免疫炎癥細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。在健康的個體內(nèi)，PD-1和PD-L1參與抑制T細(xì)胞活性防止組織自身免疫反應(yīng)；但由于腫瘤中過表達(dá)這些免疫監(jiān)測點蛋白，可以使腫瘤細(xì)胞逃過T細(xì)胞監(jiān)控的腫瘤殺傷反應(yīng)。在抗PD-1/PD-L1治療的臨床實驗中，病人的無進展生存期（PFS）和整體生存期（OS）在使用pembrolizumab治療NSCLC組均優(yōu)于單純使用*藥物組。與此同時人們發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)分類的NSCLC病人中僅約有20%的病人對抗PD-1/PD-L1抗體藥物治療有效。因而在臨床上有必要篩選對治療敏感的病人，一方面可以提高治療的有效性，另一方面也可以避免非藥物敏感類病人接受PD-1/PD-L1治療后所引起的副作用以及可能誘導(dǎo)出的自身免疫反應(yīng)。

在這篇文獻(xiàn)中，該研究團隊通過使用羅氏Ventana的特異性單克隆抗體（SP263）以及ACD公司的RNAscope原位雜交技術(shù)首先檢測了87例肺腺鱗癌（ASC）組織樣本內(nèi)的PD-L1 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。使用IHC檢測到的PD-L1表達(dá)陽性率為39.22%，使用RNAscope檢測到的陽性率為37.25%。兩種方法檢測結(jié)果沒有區(qū)別（圖1）。兩者的檢測一致性幾近（κ-coefficient為0.851），統(tǒng)計學(xué)分析顯示兩種方法沒有顯著性差異（P=1.000）。

圖示：肺腺鱗癌內(nèi)PD-L1表達(dá)檢測結(jié)果。(a) 使用免疫組化方法檢測PD-L1獲得的陽性結(jié)果(x100) (b) 使用免疫組化方法檢測PD-L1獲得的陰性結(jié)果(x100) (c) 使用RNAscope原位雜交法檢測PD-L1獲得的陽性結(jié)果 (x100) (d) 使用RNAscope原位雜交法檢測PD-L1獲得的陰性結(jié)果 (x100)。         

接著在對腺鱗癌的腺癌和鱗癌部分進行區(qū)分統(tǒng)計分析時，發(fā)現(xiàn)PD-L1表達(dá)在兩者中存在顯著性差異（P=0.017）：在腺癌內(nèi)，PD-L1的表達(dá)陽性率為11.11%，在鱗癌部分的陽性率為38.89%。前者與133例肺腺癌中統(tǒng)計得到的PD-L1表達(dá)率13.53%相似，而后者與83例肺鱗癌統(tǒng)計得到的PD-L1表達(dá)陽性率28.92%相似。

本研究繼續(xù)對比了腺鱗癌內(nèi)PD-L1的陽性表達(dá)與臨床病理特性的關(guān)系，結(jié)果顯示PD-L1的表達(dá)與病人性別、年齡、吸煙、腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯、復(fù)發(fā)和死亡無關(guān)，但與淋巴血管侵犯有顯著相關(guān)性（P=0.016）。與EGFR，KRAS和ALK突變相比，PD-L1的表達(dá)與其沒有相關(guān)性。

在文章的討論中，作者闡述了對比使用RNAscope方法檢測PD-L1 mRNA以及使用免疫組化方法檢測PD-L1蛋白的目的：在臨床上存在不同公司提供的特定克隆號的抗體可對病人樣本進行檢測，而每個抗體又有各自的cutoff值對結(jié)果進行評估。在未來的臨床病人篩選過程中，需要一種可以不區(qū)分抗體公司抗體克隆號而可定篩查全部病人樣本的檢測方法。由于基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄得到mRNA，繼而翻譯成蛋白質(zhì)，因而如果能夠在mRNA水平對PD-L1進行檢測，則將解決這一需求。故首先需要對兩者的檢測一致性進行分析。本研究之初對比了RNAscope原位雜交方法與IHC免疫組化法在肺腺鱗癌病人標(biāo)本內(nèi)測到的PD-L1的表達(dá)比率。結(jié)果顯示兩種方法一致性接近*。這一結(jié)果為今后的臨床篩選用藥病人的檢測方法提供了基礎(chǔ)的臨床數(shù)據(jù)。

RNAscope技術(shù)是由美國Advanced Cell Diagnostics (ACD)公司研發(fā)的RNA原位雜交產(chǎn)品，在近年來的生物檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速。與傳統(tǒng)的RNA原位雜交相比，RNAscope技術(shù)屬于新一代RNA原位雜交技術(shù)，其特異性的雙Z探針設(shè)計避免了傳統(tǒng)長鏈RNA探針的弊端，配以自身級聯(lián)放大檢測原理，可以敏感地檢測到目標(biāo)RNA。該技術(shù)優(yōu)勢如下：
  
1.應(yīng)用廣泛；
2.高特異性；
3.*靈敏度，單分子可視化和單細(xì)胞定量；
4.兼容降解的RNA樣本；
5.無需RNase-free操作和環(huán)境要求，一天完成實驗；
6.檢測結(jié)果穩(wěn)定一致性，兼容高通量自動化平臺；
7.多通道多靶點同時檢測。
  
Reference:
Sci Rep. 2017 Apr 7;7:46209. doi:10.1038/srep46209. PD-L1 expression in lung adenosquamous carcinomas compared with the more common variants of non-small cell lung cancer. Shi X, Wu S, Sun J, Liu Y, Zeng X, Liang Z.

RNAscope技術(shù)不但能夠進行腫瘤組織中標(biāo)志物的原位檢測，而且在神經(jīng)生物學(xué)上也有著廣泛的應(yīng)用，該技術(shù)實現(xiàn)了對大腦組織等神經(jīng)標(biāo)本的原位定量和定位分析，結(jié)果清晰準(zhǔn)確。