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技術(shù)文章

牛副結(jié)核ELISA

閱讀：131發(fā)布時(shí)間：2016-3-21

（一）材料與試劑 
1．副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原 
2．草分枝桿菌吸收抗原 
3．兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體 
4．牛副結(jié)核病參考陽(yáng)性血清 
5．牛副結(jié)核病參考陰性血清 
1～5項(xiàng)均由單位供應(yīng)。 
6．器材elisa板, 酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。 
7．試劑及溶液配制同第五節(jié)豬瘟ELISA。 
（二）操作方法 
1．抗原包被以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50μg/ml,每孔包被0.1ml。部分對(duì)照孔以牛血清白蛋白(50μg/ml)包被。 
2．血清處理取待檢血清、參考陽(yáng)性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h。取0.10ml，加血清稀釋液0.90ml(注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清)?；靹蚣纯?nbsp;
3．正式試驗(yàn)按表12－4進(jìn)行。每個(gè)樣品加2孔，以求OD平均值。 
表12－4ELISA試驗(yàn)程序表(單位ml)

（三）結(jié)果判定
在對(duì)照組成立的前提下, 即參考陽(yáng)性血清呈棕黃色,參考陰性血清及其它對(duì)照孔呈無(wú)色或淺黃色, 判定待測(cè)結(jié)果。
1．目測(cè)判定與參考陽(yáng)性血清孔顏色相當(dāng)，即呈棕黃色，判為ELISA陽(yáng)性(＋)。
2．酶標(biāo)儀判定(490nm)以底物溶液對(duì)照孔調(diào)零，校正參考陽(yáng)性血清OD值為1.0(或相應(yīng)規(guī)定值)，測(cè)定待檢孔。當(dāng)OD≥0.50，判ELISA陽(yáng)性(＋)；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝(±)；OD<0.40，判ELISA陰性(－)。


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