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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)背景深全部呈有色原因及解決方案

閱讀：304發(fā)布時(shí)間：2016-3-28

ELISA實(shí)驗(yàn)中，背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）

根據(jù)技術(shù)分析，可能存在的原因有一下幾條：

 

1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留

  解決辦法：洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，靜置15秒，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

 

2、底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色

解決辦法：棄去底物，重新配置

 

3、樣品稀釋液污染

  解決辦法：棄去稀釋液，重新配置

 

4、吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*

  解決辦法：吸頭盡可能一次性使用

 

5、不正確的孵育時(shí)間，溫度（尤其是底物孵育的時(shí)間）

  解決辦法：zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。*按照說(shuō)明書(shū)要求

 

6、偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過(guò)高

  解決辦法：按照說(shuō)明書(shū)調(diào)整到zui合適的濃度

 

7、ELISA板子不正確的貯存

  解決辦法：酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板

 

8、沒(méi)有正確封閉

  解決辦法：在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長(zhǎng)封閉時(shí)間

 

9、樣本溶血嚴(yán)重

  解決辦法：建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴(yán)重溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。


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