口蹄疫O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：口蹄疫O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O（ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒(注：酶標(biāo)板不可拆)、96T×2/盒（注：酶標(biāo)板一塊可拆、一塊不可拆）
【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測牛、羊、豬血清中口蹄疫O型抗體，可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒系由預(yù)包被口蹄疫O型抗體的酶標(biāo)板、抗體工作液、抗原液酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用阻斷酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛、羊、豬血清樣本中口蹄疫O型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標(biāo)板中孵育，樣本中的抗體與酶標(biāo)板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結(jié)合；經(jīng)洗滌后，再加抗體工作液孵育；經(jīng)洗滌后加入酶標(biāo)記物孵育；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫O型抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格（96T×1） | 規(guī)格（96T×2） |
1. | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標(biāo)記物 (藍(lán)蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
3. | 抗體工作液 (紅蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
4. | 抗原液 (黑蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
5. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×2 |
6. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
9. | 陽性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
11. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
12. | 自封袋 | 1個 | 1個 |
13. | 說明書 | 1份 | 1份 |
【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
2.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
3.用已稀釋的洗滌液將待檢牛、羊血清按64倍稀釋（如5μl血清加入315μl洗滌液中，混勻），待檢豬血清按32倍稀釋（如5ul血清加入155洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl；每孔再加入抗原液50μl（空白孔除外）。
注：加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當(dāng)于1:128，豬樣本稀釋比例相當(dāng)于1:64。
4.震蕩混勻10秒，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加抗體工作液50μl（空白孔除外），置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加酶標(biāo)記物50μl（空白孔除外），置37℃反應(yīng)30分鐘。
9.洗滌，同步驟5。
10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。
11.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照A值≥1.0，陽性對照A值≤50%×陰性對照A值。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.PI（阻斷率）=（1-樣本A值/陰性對照孔平均A值）×*，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。
2.本實驗檢測牛、羊血清結(jié)果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫O型抗體，且效價高于1:128，達(dá)到保護(hù)水平；反之檢測結(jié)果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫O型抗體，或效價低于1:128，未達(dá)到充足保護(hù)水平。
3.本實驗檢測豬血清結(jié)果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫O型抗體，且效價高于1:64，達(dá)到保護(hù)水平；反之檢測結(jié)果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫O型抗體，或效價低于1:64，未達(dá)到充足保護(hù)水平。
4.如需了解樣本抗體的終效價，可將樣本進(jìn)行梯度稀釋，使PI≥50%的大稀釋比例即為該樣本抗體的終效價。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性牛、羊、豬血清中口蹄疫O型抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。
