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標(biāo)準(zhǔn)化制備ELISA試劑盒

時間:2017-3-14閱讀:682
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標(biāo)準(zhǔn)化制備ELISA試劑盒

ELISA試劑盒在試驗條件(包含試劑)較難確保穩(wěn)定的情況下,這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,核算S/N值。也有寫作P/N的,這兒的P不代表陽性(positive),而是?。╬atient)的縮寫,不該誤解。為防止混雜,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿襲。
實際上每一測定體系應(yīng)該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,致使反響后發(fā)生的本底也許較正常人血清的本底低得多。陽性斷定值(cut-off value)通常為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判別成果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。ELISA試劑盒用此法判別成果請求試驗條件非常穩(wěn)定,陽性和陰性的對照品應(yīng)契合必定的標(biāo)準(zhǔn),須配用精密的儀器,并嚴(yán)厲按規(guī)定操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中通過對大量標(biāo)本的試驗檢查而得到的。
ELISA試劑盒現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先核算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)有必要大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗才有用。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此規(guī)模,則棄去,罷了另兩個陰性對照從頭核算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)模,則該次試驗無效。
陽性斷定值按下式核算: 
ELISA試劑盒陽性斷定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性斷定值的為陽性,小于陽性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。

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