ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，pRB Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，pRB Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

pRB Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn)：

1. 標(biāo)本的采取和保存。
2. 試劑的準(zhǔn)備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標(biāo)比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。pRB Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，pRB Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，pRB Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

pRB Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyK032Hu    人含V-Set域T細(xì)胞激活抑制因子1(VTCN1)檢測試劑盒    ELISA Kit for V-Set Domain Containing T-HZll Activation Inhibitor 1 (VTCN1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyF128Hu    人不均一核核糖核蛋白U(HNRPU)檢測試劑盒    ELISA Kit for Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein U (HNRPU)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyC722Hu    人前折疊蛋白亞基1(PFDN1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Prefoldin Subunit 1 (PFDN1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyM762Hu    人蝰蛇毒素(Viperin)檢測試劑盒    ELISA Kit for Viperin     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyL930Hu    人信號素3F(SEMA3F)檢測試劑盒    ELISA Kit for Semaphorin 3F (SEMA3F)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA730Hu    人骨成型蛋白受體1B(BMPR1B)檢測試劑盒    ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein ReHZptor 1B (BMPR1B)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyK073Hu    人Zeste同源物增強(qiáng)子2(EZH2)檢測試劑盒    ELISA Kit for EnhanHZr Of Zeste Homolog 2 (EZH2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyE651Hu    人微小染色體維持缺陷蛋白5(MCM5)檢測試劑盒    ELISA Kit for Minichromosome MaintenanHZ Deficient 5 (MCM5)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyE110Hu    人肝配蛋白A4(EFNA4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Ephrin A4 (EFNA4)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyC709Hu    人前妊娠蛋白關(guān)聯(lián)子宮內(nèi)膜蛋白(PAEP)檢測試劑盒    ELISA Kit for Progestagen Associated Endometrial Protein (PAEP)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA781Hu    人CD276分子(CD276)檢測試劑盒    ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 276 (CD276)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyF421Hu    人衰老關(guān)鍵蛋白4(FBLN4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Fibulin 4 (FBLN4)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyL761Hu    人氨酰tRNA合成酶復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyD809Hu    人堿性唾液*豐富蛋白2(PRB2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Basic Salivary Proline Rich Protein 2 (PRB2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyD810Hu    人堿性唾液*豐富蛋白1(PRB1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Basic Salivary Proline Rich Protein 1 (PRB1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyQ088Hu    人Dickkopf相關(guān)蛋白4(DKK4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Dickkopf Related Protein 4 (DKK4)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyG151Hu    人天冬氨酸β羥化酶(ASPH)檢測試劑盒    ELISA Kit for Aspartate Beta Hydroxylase (ASPH)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyF879Hu    人分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Secreted Frizzled Related Protein 2 (SFRP2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyN690Hu    人含膠原三螺旋重復(fù)蛋白1(CTHRC1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Collagen Triple Helix Repeat Containing Protein 1 (CTHRC1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyJ668Hu    人AE結(jié)合蛋白1(AEBP1)檢測試劑盒    ELISA Kit for AE Binding Protein 1 (AEBP1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml