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腎透明細(xì)胞癌;Caki-1

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所  在  地上海市

更新時間:2021-04-07 20:25:36瀏覽次數(shù):681次

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公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:

產(chǎn)品名稱

生長特性

貨號

腎透明細(xì)胞癌;Caki-1

貼壁生長

EY-X63398

細(xì)胞名稱  腎透明細(xì)胞癌;Caki-1
形態(tài)特性: 上皮樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中包含許多微絨毛、少許微絲、許多小線粒體、發(fā)達(dá)的高爾基休和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、許多脂滴和多層體、次級溶酶體,沒有發(fā)現(xiàn)病毒顆粒。

培養(yǎng)條件: McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS

傳代方法: 1:2~1:4傳代;每周換液2~3次。

傳代情況: C3

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
?
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率; 
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
山羊皮膚來源細(xì)胞形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-ATP2A1 Polyclonal

cerevisiae3,5-二氟Human RXRB(Retinoic acid receptor RXR-beta) ELISA Kit
豬脂肪干(永生化)拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯Human NR1I2(Nuclear receptor subfamily 1 group I member 2) ELISA Kit
小鼠胚胎干拉丁屬名: Aspergillus  tubingensis2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯Human RPS4Y1 ELISA Kit
中國倉鼠卵巢k1 亞克隆系拉丁屬名: Oceanobacillus luteolus2-氯-4-氟苯甲Human RPS9 ELISA Kit
耳蝸鼓膜上皮拉丁屬名: Gordonia sp.2-氯-4-氟苯甲Human RPS8 ELISA Kit
豬骨骼肌(永生化)注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(R)-(+)-4-羥基-2-吡咯烷酮Human RPS7 ELISA Kit
人腺癌系拉丁屬名: Massilia eurypsychrophila2,4,6-三氟Human RRAGB ELISA Kit
人卵巢癌(綠色熒光蛋白標(biāo)記)注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用仲丁鋁Human RQCD1 ELISA Kit
大鼠膠質(zhì)瘤注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用仲丁鋁Human RRAS2 ELISA Kit
人胃腺癌(綠色熒光)拉丁屬名: Bacillus  cereus仲丁鋁Human RRN3 ELISA Kit
SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維拉丁屬名: Komagataella pastoris2-乙酰基苯并噻吩Human RRAS ELISA Kit
人前列腺上

腎透明細(xì)胞癌;Caki-1兔子肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒Humanhiston-H2bELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子睪(T)ELISA試劑盒HumanIntegrinαⅤβ3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒Humanintegrinβ2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒HumanLDL-ICELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒HumanLebtospiraIgGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒HumanLebtospiraIgMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒HumanLeishimariaantibodyELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

兔子性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒HumanLipaseELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的  *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

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