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細胞介紹

從58歲男性原發(fā)性乳頭狀甲狀腺癌中分離建系，細胞維持甲狀腺濾泡細胞分化，如合成甲狀腺球蛋白。細胞表達野生型p53腫瘤抑制基因。文獻報道K1細胞來源于甲狀腺細胞系GLAG-66。

細胞特性

1）來源：乳頭狀甲狀腺癌組織

2）形態(tài)：上皮細胞樣、貼壁生長

3）含量：>1x106細胞數

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1）準備F12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2、加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

使用范圍

本公司產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞系培養(yǎng)步驟：

細胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細胞復蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DME培養(yǎng)基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學研究提供了大量的細胞樣本?。

?細胞系培養(yǎng)?的步驟主要包括細胞復蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入適量DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環(huán)境中得到有效的維持和擴展，為科學研究提供了大量的細胞樣本

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細胞接收后的處理：

1）K1（GLAG-66）人甲狀腺癌細胞收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

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