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表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB

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更新時間:2021-04-01 16:04:15瀏覽次數(shù):652次

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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:

產(chǎn)品名稱

生長特性

貨號

表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB

貼壁生長

EY-X63317

?
細胞名稱  表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB
形態(tài)特性: 上皮樣;多角

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細胞來源于293細胞,能表達小鼠MHCⅠ類分子Kb。

培養(yǎng)條件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium10%FBS

傳代方法: 1:6傳代;2天1次

傳代情況: 不詳

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
人急性淋巴細胞白血病細胞;CEM/C1形態(tài)特性: 淋巴母細胞生長特性: 懸浮生長Anti-GATAD2B Polyclonal Antibody

人腎細胞腺癌細胞;769-P形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-EFNA1 Polyclonal Antibody

人膀胱移行細胞癌;J82形態(tài)特性: 上皮細胞生長特性: 貼壁生長Anti-CERS4 Polyclonal Antibody

人前列腺癌細胞;VCaP形態(tài)特性: 上皮細胞生長特性: 貼壁生長Anti-APP Polyclonal Antibody

小鼠腎腺癌細胞;RAG形態(tài)特性: 變形蟲樣生長特性: 貼壁生長Anti-RPS5 Polyclonal Antibody

人間皮瘤細胞;NCI-H2452[H2452]形態(tài)特性: 上皮細胞生長特性: 貼壁生長Anti-TNNT2 Polyclonal Antibody

人結(jié)直腸腺癌細胞;COLO320DM[COLO320DM]形態(tài)特性: 圓形的并能折光的生長特性: 半貼壁生長Anti-MVK Polyclonal Antibody

小鼠皮膚黑色素瘤細胞;B16-F10形態(tài)特性: 黑色素細胞生長特性: 貼壁生長Anti-ATRIP Polyclonal Antibody

小鼠胰島素瘤胰島β細胞;Beta-TC-6形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-PRKDC Polyclonal Antibody

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化)形態(tài)特性: 多角形生長特性: 貼壁生長Anti-MFI2 Polyclonal Antibody

大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106形態(tài)特性: 上皮細胞生長特性: 貼壁生長Anti-CASP1 (p20,Cleaved-Asn120) Polyclonal Antibody

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化)形態(tài)特性: 多角形生長特性: 貼壁生長Anti-IFNGR2 Polyclonal Antibody

小鼠結(jié)腸癌細胞;CT26.WT形態(tài)特性: 成纖維細胞生長特性: 貼壁生長Anti-TFF2 Polyclonal Antibody

狗腎惡性組織細胞增生癥細胞;DH82形態(tài)特性: 巨噬細胞生長特性: 貼壁生長Anti-PSAT1 Polyclonal Antibody

雜交瘤細胞;14A3形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-IL27 Polyclonal Antibody

鼠源雜交瘤細胞;AV2G1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-CXXC5 Polyclonal Antibody
表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB大鼠谷氨脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒DPPⅣELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒DR-70TMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒dsDNAELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠多巴胺(DA)ELISA試劑盒dsDNAELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠(AZT)ELISA試劑盒dsDNAELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒DSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠血清一氧化氮(NO)ELISA試劑盒Dsg-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒DSIPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

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