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大鼠肺炎病毒(PVM)試劑盒說明書

時間:2016/5/11閱讀:1479
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   本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中肺炎病毒(PVM)表達。

實驗原理

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肺炎病毒(PVM)表達。用純化的大鼠肺炎病

毒(PVM)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中肺炎病毒(PVM)相結(jié)合,經(jīng)洗

滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標記的肺炎病毒(PVM)抗體結(jié)合,形成抗體

抗原 酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化

成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),

與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中大鼠肺炎病毒(PVM)的存在與否。

試劑盒組成

 

  1  30 倍濃縮洗滌液

  2  酶標試劑

  3  酶標包被板

  4  樣品稀釋液

  5  顯色劑 A 液

  6  顯色劑 B 液

  標本要求

  20ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  12 孔×8 條

  6ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  6ml×1/瓶

  7  終止液

  8  陽性對照

  9  陰性對照

  10  說明書

  11  封板膜

  12  密封袋

  6ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  1 份

  2 張

  1 個

 

  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于20℃保存,但應避免反復凍融

  2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1

孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

   2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50!l。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液 40!l,然后再加待測樣品 10!l。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

  3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50!l,空白孔除外。

  7. 溫育:操作同 3。

  8. 洗滌:操作同 5。

  9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50!l,再加入顯色劑 B50!l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

  10 分鐘.

  10. 終止:每孔加終止液 50!l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程

 

計算和結(jié)果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10 

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 

陰性判定:樣品 OD 值<  臨界值(CUT OFF)者為肺炎病毒(PVM)陰性

陽性判定:樣品 OD 值≥  臨界值(CUT OFF)者為肺炎病毒(PVM)陽性

。

注意事項

  1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

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