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分析免疫組化常見問題的處理

時間:2017/6/29閱讀:1164
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒對照/標(biāo)本無染色
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時間。
③ 對照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點是非常重要的。比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機溶劑同放一室,以免降低抗體的效價。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲存條件,用已知陽性的標(biāo)本來同時做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,zui簡單的檢測方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完,否則會失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒弱陽性
如果陰性對照沒有染色而陽性對照標(biāo)本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標(biāo)本的固定方式,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照的說明,同時結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時間是否正確。一般試劑都會對試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對所使用的一抗進行梯度測試,找出的使用濃度。
④ 切片上了過多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時,等于人為地對抗體進行了進一步的稀釋。
⑤ 孵育時切片是否放置水平,否則會導(dǎo)致抗體流失。如果陰性對照沒有反應(yīng),陽性對照反應(yīng)良好,而標(biāo)本弱陽性,則可能是由于陽性對照不是同一種組織、或固定方式不同等原因所致。
兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒     進口/原裝    英文名稱:    Rabbit anti-brain tissue antibody,ABAb ELISA Kit     規(guī)格:    96T/48T
兔p53(p53)ELISA試劑盒     *    英文名稱:    Rabbit p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit     規(guī)格:    96T/48T
兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒     *    英文名稱:    Rabbit Bcl-2 Assaciated X protein,BAX ELISA Kit     規(guī)格:    96T/48T
兔(ADR)ELISA試劑盒    進口/分裝    英文名稱:    Rabbit adramycin,ADR ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T
兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒    進口/原裝    英文名稱:    Rabbit matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T
兔抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒    *    英文名稱:    Rabbit Oncostatin-M,OSM ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T
兔血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒    *    英文名稱:    Rabbit Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T
兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒    進口/分裝    英文名稱:    Rabbit angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T
兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒     進口/原裝    英文名稱:    Rabbit soluble Factor-related Apoptosis,sFAS/Apo-1 ELISA Kit    規(guī)格:    96T/48T抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒

 

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