鼠附紅細(xì)胞體(鼠嗜血支原體)探針法熒光定量PCR試劑盒樣品 RNA 的制備
如果有N個(gè)樣品,*設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL陽性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也以選購本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板,省略了RNA提取步驟。
數(shù)據(jù)處理
如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。